مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0249L، RecA

يُعدّ بروتين RecA ضروريًا لتفاعلات إعادة التركيب الجيني التي تشمل إصلاح الحمض النووي والطفرات الناتجة عن الأشعة فوق البنفسجية. الفئات ذات الصلة: بروتينات ربط الحمض النووي أحادي السلسلة، وإنزيمات إصلاح الحمض النووي، والإنزيمات الداخلية المتخصصة في البنية. المواصفات : شروط التفاعل: محلول تفاعل RecA بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل RecA بتركيز 1X: 70 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار MgCl2، 5 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.6 عند 25 درجة مئوية). الاستخدام: التركيز 2 ملجم/مل. محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 0.1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. الأسئلة الشائعة : س: ما هو المحلول الذي يجب استخدامه مع بروتين RecA؟ ج: يمكن استخدام محلول RecA المرفق لتكوين حلزونات ثلاثية مستقرة عند إضافة ATP γ-S. لا يتم توفير ATP γ-S. يمكن استخدام منتج سيجما (A1388) ATP γ-S. تم استخدام محلول منظم مشابه للعديد من المحاليل المنشورة في الأدبيات العلمية، وهو: 25 ملي مولار من أسيتات التريس (الأس الهيدروجيني 7.8)، 4 ملي مولار من أسيتات المغنيسيوم، 0.3 ملي مولار من ATP γ-S، 0.4 ملي مولار من DTT، بنجاح مع اختبار RecA الوظيفي. س: هل المغنيسيوم ضروري لتكوين الحلزون الثلاثي باستخدام بروتين RecA؟ ج: نعم. س: هل ATP γ-S ضروري لتكوين الحلزون الثلاثي باستخدام بروتين RecA؟ ج: نعم. يعمل ATP γ-S بتركيز 0.3 ملي مولار على تثبيت الحلزون الثلاثي. لا يتم توفير ATP γ-S. يمكن استخدام منتج سيجما (A1388) ATP γ-S. س: هل بنية الحمض النووي المستهدف مهمة عند استخدام بروتين RecA؟ ج: نعم، تسمح البلازميدات فائقة الالتفاف بتكوين حلزون ثلاثي مستقر (1). (1) Zhumabayeva, B., Chenchik, A., and Siebert, PD, Biotechniques 27:834-845, 1999. س: ما مقدار بروتين RecA الذي يجب إضافته إلى الحمض النووي أحادي السلسلة لتغطيته؟ ج: النسبة المقترحة هي 3 مولات من القواعد إلى 1 مول من RecA. س: ما طول الأوليغومر أحادي السلسلة الذي يجب استخدامه مع بروتين RecA؟ ج: يجب ألا يقل طول الأوليغومر عن 30 نيوكليوتيدًا، ويمكن أن يصل إلى 60 نيوكليوتيدًا. يجب أن يكون الموقع المراد حجبه في مركز الأوليغومر.