نيو إنجلاند بيولابس، M0250S، نوكلياز فول المونج

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونوكليازات غير المحددة، تطبيقات تعديل الحمض النووي الريبي، مواصفات التضييق ، تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي أحادي السلسلة M13mp18 إلى أجزاء يقل طولها عن 1 كيلوبايت في حجم تفاعل إجمالي قدره 80 ميكرولتر في محلول تفاعل نوكلياز الفاصوليا مونج 1X عند حضانته لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل نيوكلياز الفاصوليا الخضراء 1X، يُحضن عند 30 درجة مئوية. محلول تفاعل نيوكلياز الفاصوليا الخضراء 1X، 30 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار أسيتات الصوديوم، 1 ملي مولار كبريتات الزنك (الأس الهيدروجيني 5 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين : 10 ملي مولار أسيتات الصوديوم، 0.1 ملي مولار أسيتات الزنك، 1 ملي مولار سيستين، 50% جلسرين، 0.001% تريتون® X-100، الأس الهيدروجيني 5 عند 25 درجة مئوية. الوزن الجزيئي النظري: 39 كيلو دالتون. الأسئلة الشائعة : س: هل يجب استخدام نيوكلياز الفاصوليا الخضراء أم بوليميراز الحمض النووي الأول، الجزء الكبير (كلينو) (NEB# M0210)؟ ج: يجب استخدام نيوكلياز الفاصوليا الخضراء إذا كان الهدف هو قطع امتداد 5'. إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول، الجزء الكبير (كلينو)، يُكمل امتدادًا بطول 5' ويُزيل امتدادًا بطول 3'. يمكن استخدام نوكلياز الفاصوليا الخضراء لإزالة امتداد بطول 3'، ولكن قد يكون إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول، الجزء الكبير (كلينو)، خيارًا أفضل قليلًا نظرًا لقدرة نوكلياز الفاصوليا الخضراء على العمل عند الشقوق وتحليل الأطراف أثناء "تنفسها". ملاحظة: لا يمكن إكمال امتداد بطول 3'. س: هل نوكلياز الفاصوليا الخضراء نشط في محاليل NEBuffers الأخرى؟ ج: نوكلياز الفاصوليا الخضراء نشط تمامًا أيضًا في محلول rCutSmart® Buffer. يمكن استخدام الإنزيم أيضًا في محاليل NEBuffers 1 و2 و4 وr1.1 وr2.1، ولكن يجب مضاعفة وقت التفاعل إلى ساعة واحدة عند 30 درجة مئوية عند استخدام هذه المحاليل. يكون النشاط ضعيفًا في محاليل NEBuffers 3 وr3.1. س: هل يمكن تعطيل نوكلياز الفاصوليا الخضراء بالحرارة؟ ج: لا تحاول تعطيل الإنزيم بالحرارة! على الرغم من إمكانية تعطيل إنزيم نوكلياز الفاصوليا الخضراء بالحرارة، إلا أن هذا غير مُستحسن لأن الحمض النووي يبدأ في "التنفس" قبل تعطيل الإنزيم، مما يؤدي إلى تحلل غير مرغوب فيه في مناطق التنفس. نقِّ الحمض النووي باستخدام استخلاص الفينول/الكلوروفورم والترسيب بالإيثانول أو التنقية بالعمود الدوراني. س: هل يلزم إضافة أيونات الزنك (Zn2+) إلى تفاعل نوكلياز الفاصوليا الخضراء؟ ج: لم يعد من الضروري إضافة أيونات الزنك (Zn2+) إلى تفاعلات نوكلياز الفاصوليا الخضراء. يُلبي أسيتات الزنك الموجود في محلول التخزين احتياجات الإنزيم من أيونات الزنك حتى بعد التخفيف في التفاعل. س: هل يُؤدي إنزيم نوكلياز الفاصوليا الخضراء إلى تحلل الحمض النووي ثنائي السلاسل؟ ج: عند استخدامه في درجات حرارة أعلى من 30 درجة مئوية الموصى بها، أو لفترات أطول، سيؤدي ذلك إلى تحلل الحمض النووي. علاوة على ذلك، بما أن النشاط الداخلي معروف بحدوثه في "فقاعات" على حلزون الحمض النووي، والتي تتشكل بشكل عابر على طول الجزيء، فإن الركائز التي تم قطعها بالفعل، أو التي تحتوي على نسبة عالية من AT تكون أكثر عرضة لهذا النشاط الداخلي.