نيو إنجلاند بيولابس، M0262S، إكسونوكلياز لامدا

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونيوكليازات غير المحددة. تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإنتاج 10 نانومول من ديوكسي ريبونوكليوتيد قابل للذوبان في الأحماض من ركيزة مزدوجة السلاسل في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في محلول تفاعل لامدا إكسونوكلياز 1X مع 1 ميكروغرام من الحمض النووي المزدوج [3H] المُعالج بالموجات فوق الصوتية. شروط التفاعل: محلول تفاعل إكسونوكلياز لامدا 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل إكسونوكلياز لامدا 1X، 67 ملي مولار جليسين-KOH، 2.5 ملي مولار MgCl2، 50 ميكروغرام/مل BSA (الأس الهيدروجيني 9.4 عند 25 درجة مئوية). تركيز الاستخدام : 5000 وحدة/مل. محلول التخزين: 25 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جليسرول، الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري : 75 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الوزن الجزيئي النظري: 28000 دالتون. النشاط النوعي : 50000 وحدة/ملغ. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إكسونوكلياز M0262 لامدا في محاليل NEB المختلفة؟ ج: يُدرج أدناه نشاط إنزيم لامدا إكسونوكلياز في محاليل منظمة مختلفة: محلول NEBuffer 1 - 15%، محلول NEBuffer 2 - 40%، محلول NEBuffer 3 - 10%، محلول NEBuffer 4 - 40%، CutSmart - 50%، محلول تفاعل إكسونوكلياز I - 100%، محلول تفاعل Thermopol - 100%. س: ما الفرق بين إنزيم T5 إكسونوكلياز وإنزيم لامدا إكسونوكلياز (NEB# M0262)؟ ج: على عكس إنزيم لامدا إكسونوكلياز، يستطيع إنزيم T5 إكسونوكلياز تحليل الحمض النووي الدائري المزدوج ذي الشقوق. كما يعمل إنزيم T5 إكسونوكلياز على الحمض النووي أحادي السلسلة، بينما لا يعمل إنزيم لامدا إكسونوكلياز عليه. س: ما الفرق بين إنزيم T7 إكسونوكلياز وإنزيم لامدا إكسونوكلياز (NEB# M0262)؟ ج: يتميز إنزيم إكسونوكلياز T7 بنشاط أقل على الحمض النووي أحادي السلسلة مقارنةً بإنزيم إكسونوكلياز لامدا، ويعمل عند الشقوق على عكس إنزيم إكسونوكلياز لامدا، كما أنه أقل كفاءة في معالجة الحمض النووي. ونظرًا لكفاءته المنخفضة، قد يكون أكثر فائدةً لعمليات الحذف المتداخلة أحادية الاتجاه. يمكن تخفيف الإنزيم للتحكم في سرعة التفاعل. مع إنزيم عالي الكفاءة، مثل إنزيم إكسونوكلياز لامدا، ينتج عن التخفيف مزيج من نواتج مهضومة بالكامل وركيزة غير مهضومة. س: هل يعمل إنزيم إكسونوكلياز لامدا في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، يعمل إنزيم إكسونوكلياز لامدا في محلول rCutSmart. لمعرفة نسبة نشاطه الوظيفي في محلول rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®. س: هل يمكن استخدام إنزيم إكسونوكلياز I مع إنزيم إكسونوكلياز ثنائي السلسلة لتنقية مستحضرات البلازميد؟ ج: يمكن استخدام إنزيم إكسونوكلياز I مع إنزيم لامدا إكسونوكلياز (NEB# M0262) لتنقية تحضيرات البلازميد. كما يمكن استخدام إنزيم إكسونوكلياز III (NEB# M0206) وإنزيم T7 إكسونوكلياز (NEB# M0263)، ولكنهما قد يُتلفان البلازميدات المُقطّعة. على الرغم من إمكانية استخدام إنزيم إكسونوكلياز I، فإننا نوصي باستخدام إنزيم إكسونوكلياز V (RecBCD) (NEB #M0345) لإزالة الحمض النووي الصبغي بعد تحضير البلازميد (راجع ملاحظة التطبيق الخاصة بنا: استخدام إنزيم إكسونوكلياز V (RecBCD) للتخلص من الحمض النووي الجينومي المتبقي عند تنقية البلازميدات منخفضة النسخ باستخدام مجموعة Monarch® Plasmid Miniprep Kit).