مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0264L، RecJf

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونيوكليازات غير المحددة. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإنتاج 0.05 نانومول من ديوكسي ريبونوكليوتيد قابل للذوبان في حمض ثلاثي كلورو الأسيتيك في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في محلول NEBuffer 2 بتركيز 1X مع 1.5 ميكروغرام من الحمض النووي أحادي السلسلة المُعَلَّم بـ [3H] من بكتيريا الإشريكية القولونية. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 2 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 2 بتركيز 1X، يحتوي على: 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل BSA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري : 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط RecJf في محاليل NEBuffer؟ ج: محلول NEBuffer 1: 20%، محلول NEBuffer 2: 100%، محلول NEBuffer 3: 100%، محلول NEBuffer 4: 100%. س: هل يمكن جعل أطراف الحمض النووي غير متداخلة باستخدام RecJf؟ ج: لا، النهايات القصيرة التي يبلغ طولها 4 أزواج قاعدية أو أقل ليست ركائز جيدة. استخدم بوليميراز الحمض النووي الأول، الجزء الكبير (كلينو) (NEB# M0210) لملء النهايات المتدلية 5' (وتسمى أيضًا النهايات المتراجعة 3') وقم بإزالة النهايات المتدلية 3'، أو استخدم نوكلياز فول المونج (NEB# M0250) لإزالة النهايات المتدلية 3' أو 5'. ملاحظة: لا يمكن ملء النهايات المتدلية 3'. س: ما الفرق بين RecJf و Exonuclease I (NEB# M0293)؟ ج: يعمل RecJf من 5' إلى 3' على عكس Exonuclease I الذي يعمل من 3' إلى 5'. س: هل يمكن تعطيل RecJf بالحرارة؟ ج: نعم. قم بتعطيله بالحرارة عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. س: هل سيعمل RecJf في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، سيعمل إنزيم RecJF في محلول rCutSmart. لمعرفة نسبة نشاطه الوظيفي في rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®.