مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0268S، إندونوكلياز III (Nth)

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 1 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على موقع AP واحد*، في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر، خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، في محلول منظم لتفاعل إنزيم النوكلياز الداخلي III بتركيز 1X، يحتوي على 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مُوسَم بصبغة فلورية. *يُنشأ موقع AP بمعالجة 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على بقايا يوراسيل واحدة، بوحدة واحدة من إنزيم يوراسيل-دي إن إيه جليكوزيلاز (UDG) لمدة دقيقتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل إندونوكلياز III (Nth) بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل إندونوكلياز III (Nth) بتركيز 1X، 20 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية). تركيز الاستخدام: 10000 وحدة/مل. محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل BSA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4. التعطيل الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. شروط فحص الوحدة : محلول تفاعل إندونوكلياز III (Nth) بتركيز 1X يحتوي على 10 بيكومول من ثنائيات النيوكليوتيدات الموسومة بالفلورسنت في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إندونوكلياز III في محلول NEBuffer؟ س: ما هي أنواع القواعد التالفة التي يتعرف عليها إنزيم إندونوكلياز III ويزيلها؟ ج: يكون إنزيم إندونوكلياز III نشطًا تمامًا في جميع المحاليل الأربعة. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم إندونوكلياز III؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم إندونوكلياز III 23 كيلو دالتون. س: ما هي أنواع القواعد التالفة التي يتعرف عليها إنزيم إندونوكلياز III ويزيلها؟ ج: من بين القواعد التالفة التي يتعرف عليها إنزيم إندونوكلياز III ويزيلها: اليوريا، و5،6-ثنائي هيدروكسي ثيمين، وثايمين جليكول، و5-هيدروكسي-5-ميثيل هيدانتون، ويوراسيل جليكول، و6-هيدروكسي-5،6-ثنائي هيدروكسي ثيمين، وميثيل تارترونيل يوريا. س: هل إنزيم إندونوكلياز III بروتين مُوسَم؟ ج: لا، إنزيم إندونوكلياز III ليس بروتينًا مُوسَمًا. س: ما هي الركيزة المستخدمة لاختبار نشاط إنزيم إندونوكلياز III؟ ج: تُوصف الركائز المستخدمة لاختبار نشاط الإنزيم في تعريف وحدة كل إنزيم. بالنسبة لإنزيم إندونوكلياز III، فإن الركيزة المستخدمة هي جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على موقع AP واحد. س: هل يعمل إنزيم إندونوكلياز III في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، يعمل إنزيم إندونوكلياز III في محلول rCutSmart. لمعرفة نسبة نشاطه الوظيفي في محلول rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®.