نيو إنجلاند بيولابس، M0281S، مثبط جليكوزيلاز اليوراسيل (UGI)

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف وحدة واحدة من إنزيم UGI بأنها كمية البروتين اللازمة لتثبيط وحدة واحدة من إنزيم UDG في بكتيريا الإشريكية القولونية خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. وحدة واحدة من إنزيم UDG هي كمية الإنزيم التي تحفز إطلاق 60 بيكومول من اليوراسيل في الدقيقة من الحمض النووي المزدوج السلاسل المحتوي على اليوراسيل. شروط التفاعل: محلول تفاعل UDG بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل UDG بتركيز 1X: 20 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار DTT، 1 ملي مولار EDTA (الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل BSA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري: 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الأسئلة الشائعة : س: ما طبيعة مثبط يوراسيل جليكوزيلاز؟ ج: UGI هو بروتين. س: كيف يثبط UGI إنزيم UDG؟ ج: UGI قادر على تفكيك معقدات UDG-DNA. يرتبط بـ UDG بنسبة 1:1. س: هل يثبط UGI نشاط جميع إنزيمات UDG؟ ج: يستطيع إنزيم UGI تثبيط نشاط إنزيم UDG في بكتيريا الإشريكية القولونية، وكذلك نشاط إنزيمات UDG من أنواع أخرى. مع ذلك، لا يستطيع UGI تثبيط نشاط إنزيم UDG في بكتيريا Afu. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم UGI؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم UGI 9.5 كيلو دالتون. س: لماذا من الضروري استخدام إنزيم UGI في التفاعل؟ ج: يبقى إنزيم UDG نشطًا جزئيًا بعد المعالجة الحرارية عند 95 درجة مئوية. يمكن إضافة إنزيم UGI إلى التفاعل لمنع التحلل اللاحق للحمض النووي الناتج.