مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0294S، إنزيم نوكلياز Tth IV

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 1 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 60 قاعدة، يحتوي على موقع AP واحد*، في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 65 درجة مئوية. * يتم إنشاء موقع AP بمعالجة 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 60 قاعدة، يحتوي على بقايا يوراسيل واحدة، بوحدة واحدة من إنزيم يوراسيل-دي إن إيه جليكوزيلاز (UDG) لمدة دقيقتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل ThermoPol® بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 65 درجة مئوية. محلول تفاعل ThermoPol® بتركيز 1X، 20 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار (NH4)2SO4، 10 ملي مولار KCl، 2 ملي مولار MgSO4، 0.1% Triton® X-100 (الأس الهيدروجيني 8.8 عند 25 درجة مئوية). تركيز الاستخدام: 10000 وحدة/مل. محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، 0.1% Triton® X-100، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: لا يوجد. شروط فحص الوحدة : محلول تفاعل ThermoPol® بتركيز 1X يحتوي على 5 بيكومول من ثنائي أوليغونوكليوتيد موسوم بالفلورسنت في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر. الأسئلة الشائعة : س: كيف يعمل إنزيم Tth Endonuclease IV في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)؟ ج: يمكن لإنزيم Tth Endonuclease IV البقاء على قيد الحياة خلال دورات تفاعل البلمرة المتسلسل المعتادة. وتعتمد نسبة بقائه على الظروف المحددة. يتميز هذا الإنزيم بثبات حراري أعلى بكثير في محلول ThermoPol مقارنةً بمحلول Taq القياسي، ونوصي بإضافة أيونات الزنك (عادةً ZnCl2) إلى التفاعل بتركيز 25 ميكرومولار لضمان ثبات الإنزيم الحراري. لم نلاحظ أي تأثير لهذا المستوى من الزنك على تفاعلات البلمرة المتسلسل.