نيو إنجلاند بيولابس، M0297L، RNase H

تمت إعادة صياغة إنزيم RNase H باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10250970. الفئات ذات الصلة : إنزيمات RNase، تحليل ما فوق النسخ، تخليق الحمض النووي المكمل (cDNA) وإنزيمات النسخ العكسي. التطبيقات: تفاعل البوليميراز المتسلسل العكسي (RT-PCR) وتخليق الحمض النووي المكمل (cDNA)، مواصفات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لإنتاج 1 نانومول من النيوكليوتيدات الريبية من 20 بيكومول من هجين RNA-DNA موسوم بالفلورة مكون من 50 زوجًا قاعديًا في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر في 20 دقيقة عند 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل RNase H بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل RNase H بتركيز 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 75 ملي مولار KCl، 3 ملي مولار MgCl2، 10 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 8.3 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 50 ملي مولار KCl، 10 ملي مولار Tris-HCl، 0.1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. الأسئلة الشائعة : س: عند إذابة محلول تفاعل RNase H بتركيز 10X، ألاحظ راسبًا أبيض. ما هو وماذا أفعل حياله؟ ج: الراسب الأبيض هو DTT الموجود في المحلول بتركيز 10X، وسيعود للذوبان عند الإذابة والخلط. المحلول المُعلق فعال تمامًا للاستخدام المقصود. س: هل إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول نشط في محلول RNase H؟ ج: نعم، إنزيم بوليميراز الحمض النووي الأول نشط في محلول RNase H. مع ذلك، يُنصح باستخدام NEBuffer 2 لاستخدام كلا الإنزيمين في تفاعل واحد. س: من أي جانب من قاعدة الحمض النووي الريبي يقطع RNase H؟ ج: يقطع RNase H الرابطة 3'-OP في الحمض النووي الريبي، مُنتجًا مجموعة هيدروكسيل 3' ومجموعة فوسفات 5'. س: ما هو نشاط RNase H عند 30 درجة مئوية؟ ج: يبلغ نشاط RNase H عند 30 درجة مئوية حوالي 90%.