نيو إنجلاند بيولابس، M0298L، إنزيم كري ريكومبيناز

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إعادة التركيب، المواصفات، تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لإنتاج أقصى قدر من إعادة التركيب الموضعي لـ 0.25 ميكروغرام من الحمض النووي pLox2+ كعنصر تحكم خلال 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. يتم تحديد أقصى قدر من إعادة التركيب عن طريق تحليل هلام الأغاروز وتحويل التفاعلات متبوعًا بالاختيار على أطباق الأمبيسيلين. شروط التفاعل: محلول تفاعل Cre Recombinase بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل Cre Recombinase بتركيز 1X: 33 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية). تركيز الاستخدام: 1000 - 15000 وحدة/مل. محلول التخزين: 15 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 0.3 مليغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري : 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الأسئلة الشائعة : س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم Cre Recombinase؟ ج: 38 كيلو دالتون. س: هل يمكن استخدام إنزيم Cre Recombinase لتخطيط BAC الذي يحتوي على موقع loxP؟ ج: لم نختبر ذلك هنا، ولكن قد تكون الورقة البحثية التالية مفيدة: Buchholz F, Bishop M. (2001). Biotechniques 31(4):906-918 "الاستنساخ الموجه بتقنية LoxP: استخدام إنزيم Cre recombinase كإنزيم تقييد عام." س: ما هو تسلسل مواقع loxP في الحمض النووي pLox2+ المستخدم مع إنزيم Cre Recombinase؟ ج: 5' ATAACTTCGTATAATGTATGCTATACGAAGTTAT 3' (1) (1) Metzger, D. and Feil, R. (1999) Curr. Opin. Biotechnol. 10, 470-476. س: لماذا لا تظهر حزم المنتج من مزيج تفاعل Cre Recombinase بوضوح عند تشغيلها على هلام الأغاروز؟ ج: يُنصح بحضانة مزيج تفاعل Cre Recombinase عند 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق قبل تحليل هلام الأغاروز. يساعد ذلك في تقليل التشوهات في الهلام. س: هل يمكن استخدام Cre Recombinase لنقل قطعة مُدرجة بين نواقل التعبير؟ ج: نعم، إذا كان الإدخال موجودًا في ناقل مانح وتم تعديل ناقل التعبير هندسيًا لاستقباله. حاليًا (10/02)، لا تبيع شركة NEB مجموعة أدوات لصنع بلازميدات مانحة، ولم يتم تعديل أي من بلازميداتنا هندسيًا لاستقبال الإدخالات. يُرجى مراجعة مدير المنتج للاطلاع على آخر المستجدات المتعلقة بهندسة البلازميدات.