نيو إنجلاند بيولابس، M0299L، إندونوكلياز VIII

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 1 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على موقع AP واحد*، في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر، خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية، في محلول منظم تفاعل إنزيم النوكلياز الداخلي VIII بتركيز 1X، يحتوي على 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مُوسَم بصبغة فلورية. *يُنشأ موقع AP بمعالجة 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على بقايا يوراسيل واحدة، بوحدة واحدة من إنزيم يوراسيل-دي إن إيه جليكوزيلاز (UDG) لمدة دقيقتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل إندونوكلياز VIII بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل إندونوكلياز VIII بتركيز 1X، 10 ملي مولار Tris-HCl، 75 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار EDTA (الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار NaCl، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 75 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. شروط فحص الوحدة : محلول تفاعل إندونوكلياز VIII بتركيز 1X يحتوي على 10 بيكومول من ثنائي أوليغونوكليوتيد موسوم بالفلورسنت في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إندونوكلياز VIII في محاليل NEBUffers؟ ج: يتمتع إنزيم Endo VIII بنشاط 75% في محلولي NEBuffer 1 و4، ونشاط 50% في محلول NEBuffer 2. لا يُنصح باستخدام محلول NEBuffer 3. س: هل يقوم إنزيم Endonuclease VIII بقطع الحمض النووي الريبوزي (RNA)؟ ج: لا يُظهر إنزيم Endonuclease VIII أي نشاط على الحمض النووي الريبوزي (RNA). س: هل تُخلّف معالجة الحمض النووي (DNA) بإنزيم Endonuclease VIII مجموعة فوسفات في الطرف 5'؟ ج: نعم. بعد هضم الحمض النووي (DNA) بواسطة إنزيم Endonuclease VIII، يُمكن ربط الحمض النووي (DNA) مباشرةً دون الحاجة إلى معالجته بإنزيم كيناز. س: ما هي القواعد التالفة التي يتعرف عليها إنزيم Endonuclease VIII؟ ج: القواعد التالفة التي يتعرف عليها إنزيم Endonuclease VIII هي: اليوريا، و5،6-ثنائي هيدروكسي ثيمين، وثايمين جليكول، و5-هيدروكسي-5-ميثيل هيدانتون، ويوراسيل جليكول، و6-هيدروكسي-5،6-ثنائي هيدرو ثيمين، وميثيل تارترونيل يوريا. س: هل يعمل إنزيم إندونوكلياز VIII في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، يعمل إنزيم إندونوكلياز VIII في محلول rCutSmart. لمعرفة نسبة نشاطه الوظيفي في محلول rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®.