مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0304S، إندونوكلياز IV

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 1 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على موقع AP واحد*، في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر خلال ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. *يُنشأ موقع AP بمعالجة 10 بيكومول من جزيء أوليغونوكليوتيد مزدوج مكون من 34 قاعدة، يحتوي على بقايا يوراسيل واحدة، بوحدة واحدة من إنزيم يوراسيل-دي إن إيه جليكوزيلاز (UDG) لمدة دقيقتين عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 3 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 3 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل BSA، 50% جلسرين، 0.15% Triton® X-100، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 85 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. شروط فحص الوحدة : محلول NEBuffer™ 3 بتركيز 1X يحتوي على 10 بيكومول من ثنائي أوليغونوكليوتيد موسوم بالفلورسنت في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إنزيم Endonuclease IV في محاليل NEBuffer؟ ج: المحلول الأمثل لإنزيم Endo IV هو NEBuffer 3 بتركيز 1X. لا يُظهر أي نشاط في NEBuffer 1، ويكون نشاطه 100% في NEBuffer 2، و25% في NEBuffer 4. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم Endonuclease IV؟ ج: الوزن الجزيئي لإنزيم Endonuclease IV هو 31 كيلو دالتون. س: هل يقوم إنزيم Endonuclease IV بقطع الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA)؟ ج: نعم، يقوم إنزيم Endonuclease IV بقطع المواقع الخالية من القواعد على كل من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) والحمض النووي ثنائي السلسلة (dsDNA). س: هل الطرف 5' الناتج عن قطع إنزيم Endonuclease IV مناسب للربط اللاحق بواسطة إنزيم T4 DNA ligase؟ ج: الطرف 5' الناتج عن قطع إنزيم Endonuclease IV غير مناسب للربط. س: بالإضافة إلى مواقع AP، هل يمتلك إنزيم Endonuclease IV نشاط قطع على أنواع أخرى من تلف الحمض النووي؟ ج: يتعرف إنزيم Endo IV أيضًا على 5,6-ثنائي هيدروثايمين. مع ذلك، فإن نشاطه على هذا الركيزة أقل من نشاطه على مواقع AP. لمزيد من المعلومات، يُرجى مراجعة هذه الصفحة على موقعنا الإلكتروني: (إنزيمات إصلاح الحمض النووي). س: هل يمكن إنشاء موقع خالٍ من القاعدة ثم قطعه باستخدام إنزيم Endonuclease IV في نفس التفاعل؟ ما مدى نشاط إنزيم Uracil-DNA-Glycosylase (رقم المنتج M0280S) في محلول Endonuclease IV؟ ج: محلول Endonuclease IV هو NEBuffer 3. إنزيم UDG نشط بنسبة 100% في NEBuffer 3، وبالتالي من الممكن إجراء كلا التفاعلين في NEBuffer 3.