مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0308S، T4 PDG (إنزيم نوكلياز T4 الخامس)

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة بأنها كمية الإنزيم التي تحفز تحويل 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19 فائق الالتفاف والمُشعَّع بالأشعة فوق البنفسجية إلى بلازميد مُقَطَّع بنسبة تزيد عن 95% في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر خلال 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. يتم تقييم التَقَطُع بواسطة الرحلان الكهربائي على هلام الأغاروز. يحتوي البلازميد المُشعَّع على ما معدله 3-5 ثنائيات بيريميدين. شروط التفاعل: محلول تفاعل T4 PDG بتركيز 1X، مُضاف إليه 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المُعاد تركيبه، من الدرجة المستخدمة في البيولوجيا الجزيئية. يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل T4 PDG بتركيز 1X: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 25 ملي مولار فوسفات ثنائي الصوديوم (الأس الهيدروجيني 7.2 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 250 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 50% جلسرين، 0.15% تريتون X-100، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: لا يوجد. شروط فحص الوحدة : محلول تفاعل T4 PDG بتركيز 1X يحتوي على 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي pUC19 فائق الالتفاف المُشعّع بالأشعة فوق البنفسجية، مُضاف إليه 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المُعاد تركيبه. تفاعل بحجم 20 ميكرولتر. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إنزيم T4 PDG في محاليل NEBuffers الأخرى، بما في ذلك rCutSmart؟ ج: إنزيم T4 PDG نشط تمامًا في rCutSmart وNEBuffer 4، ونشط بنسبة 75% في محاليل NEBuffers من 1 إلى 3. يجب إضافة الألبومين المؤتلف (rAlbumin) إلى جميع المحاليل التي لا تحتوي عليه. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم T4 PDG؟ ج: الوزن الجزيئي لإنزيم T4 PDG هو 16 كيلو دالتون. س: هل إنزيم T4 PDG بروتين مُوسَم؟ ج: لا، إنزيم T4 PDG ليس بروتينًا مُوسَمًا. س: هل يمكن استخدام إنزيم T4 PDG في اختبار المذنب؟ ج: لم نختبر إنزيم T4 PDG في اختبار المذنب. س: هل يزيل إنزيم T4 PDG القاعدة التالفة؟ ج: نعم. يزيل إنزيم T4 PDG القاعدة التالفة، على عكس إنزيم UV Damage Endonuclease الذي يُحدث شقوقًا في الحمض النووي فقط. س: ما نوع الحمض النووي التالف الذي يتعرف عليه إنزيم T4 PDG؟ ج: يتعرف إنزيم T4 PDG على ثنائيات البيريميدين الحلقية من نوع cis-syn الناتجة عن التعرض للأشعة فوق البنفسجية.