مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0338S، XRN-1

إنزيم XRN-1 هو إنزيم إكسوريبونوكلياز عالي الكفاءة يعمل على تسلسل الحمض النووي الريبوزي من الطرف 5' إلى الطرف 3'، ويتطلب وجود جزيء أحادي الفوسفات في الطرف 5'. كما أنه يعمل على الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) الذي يحتوي على جزيء أحادي الفوسفات في الطرف 5'، ولكن بكفاءة أقل بكثير. التصنيفات ذات الصلة: إنزيمات الريبونوكلياز، تحليل ما فوق النسخ، تعديل الحمض النووي الريبوزي. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم التي تهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبوزي المُفسفر من الخميرة خلال 60 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 3 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 3 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 20 ملي مولار Tris-HCl، 500 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 2 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، 0.1% (وزن/حجم) Triton® X-100. الأسئلة الشائعة : س: هل يستطيع XRN-1 هضم الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) الذي يحتوي على أحادي فوسفات 5'؟ ج: نعم. ومع ذلك، فإنه سيقطع الحمض النووي أحادي السلسلة بكفاءة أقل من الحمض النووي الريبي (RNA) الذي يحتوي على أحادي فوسفات 5'. س: هل XRN-1 بروتين مُوسَم؟ ج: لا، XRN-1 ليس بروتينًا مُوسَمًا. س: هل يُعرف XRN-1 بأسماء أخرى في المراجع العلمية؟ ج: نعم. يُشار إلى XRN1 في المراجع العلمية بالأسماء KEM1 وSEP1 وDST2 وRAR5 وSKI1 وDST2. س: هل XRN-1 يتحمل الملح؟ ج: لم يُلاحظ أي انخفاض ملحوظ في النشاط عند تركيز 400 ملي مولار من الملح. س: ما هو الوزن الجزيئي لـ XRN-1؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لـ XRN-1 حوالي 175 كيلو دالتون. س: هل من الممكن هضم الحمض النووي الريبي الخطي المقاوم لإنزيم RNase R (NEB #M0100)؟ ج: نعم، لقد اختبرنا طريقتين لهضم الحمض النووي الريبي الخطي المقاوم لإنزيم RNase R: نوصي بإضافة وحدة واحدة من إنزيم RNase R، ووحدة واحدة من XRN-1 (NEB #M0338)، و5 وحدات من RppH (NEB #M0356) إلى 1 ميكروغرام من عينة الحمض النووي الريبي في محلول تفاعل RNase R بتركيز 1X. يجب حضانة التفاعل لمدة 15 أو 30 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لإزالة الحمض النووي الريبي الخطي بكفاءة. قم بمعالجة عينات الحمض النووي الريبوزي (RNA) مسبقًا باستخدام بوليميراز بولي أدينين (Poly(A)) من الإشريكية القولونية (NEB #M0276) لإطالة نهايات 3' للحمض النووي الريبوزي، مما يُحسّن ارتباط ونشاط إنزيم RNase R. يجب تنقية الحمض النووي الريبوزي قبل البدء بتفاعل RNase R.