نيو إنجلاند بيولابس، M0357L، ناقلة غلوكوزيل بيتا لفيروس T4 (T4-BGT)

ينقل إنزيم بيتا-غلوكوزيل ترانسفيراز الخاص بفيروس T4 جزيء الغلوكوز من يوريدين ثنائي فوسفات الغلوكوز (UDP-Glc) تحديدًا إلى بقايا 5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين (5-hmC) في الحمض النووي المزدوج، مُكَوِّنًا بيتا-غلوكوزيل-5-هيدروكسي ميثيل سيتوزين (1,2). التصنيفات ذات الصلة : الكشف عن الهيدروكسي ميثيل وتحليله، التحويل الإنزيمي لتحليل مثيلة الحمض النووي، مواصفات تحليل مثيلة الحمض النووي. تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لحماية 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي T4gt-DNA من التحلل بواسطة إنزيم القطع MfeI. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 4 بتركيز 1X، مُضاف إليه 40 ميكرومول من يوريدين ثنائي الفوسفات جلوكوز، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 4 بتركيز 1X، 50 ملي مول من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مول من أسيتات التريس، 10 ملي مول من أسيتات المغنيسيوم، 1 ملي مول من ثنائي ثيوثريتول (DTT) (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين: 20 ملي مول من فوسفات البوتاسيوم، 200 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 0.25 ملي مول من ثنائي ثيوثريتول (DTT)، 0.1 ملي مول من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك (EDTA)، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الوزن الجزيئي النظري: 40666 كيلو دالتون . شروط فحص الوحدة : 0.5 ميكروغرام من T4gt-DNA، محلول NEBuffer™ 4 بتركيز 1X، و40 ميكرومول من يوريدين ثنائي الفوسفات جلوكوز. في تفاعل حجمه 30 ميكرولتر. يُحضن لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية، ثم لمدة 10 دقائق عند 65 درجة مئوية. يُحدد مدى الحماية بواسطة إنزيم T4-BGT بإضافة 20 ميكرولتر من محلول NEBuffer 4 بتركيز 1X و10 وحدات من إنزيم MfeI. يُحضن المزيج لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، ثم يُحلل على هلام الأغاروز. خصائص الإنزيم: النشاط في محاليل NEBuffer: NEBuffer 1: 100، NEBuffer 2: 50، NEBuffer 3: 50، NEBuffer 4: 100%. نسبة البقاء في التفاعل: يلزم 0.16 وحدة على الأقل لمدة 16 ساعة لحماية 0.5 ميكروغرام من الحمض النووي T4 gt-DNA من التحلل بواسطة إنزيم MfeI. سؤال وجواب : هل يعمل إنزيم T4-BGT (ناقلة غلوكوزيل بيتا لفيروس T4) في محلول rCutSmart؟ ج: يعمل إنزيم بيتا-غلوكوزيل ترانسفيراز الخاص بفيروس T4 (T4-BGT) في محلول rCutSmart. لمعرفة نسبة نشاطه الوظيفي في rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®.