Product Description
هل تبحث عن تركيبات وأنواع إضافية من إنزيم T4 DNA Ligase؟ الفئات ذات الصلة: إنزيمات ربط الحمض النووي، التطبيقات: الاستنساخ، الربط، الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. المواصفات: التعطيل الحراري: لا. الأسئلة الشائعة: س: هل أحتاج إلى تحويل تفاعلات مزيج Instant Sticky-end Ligase Master Mix فورًا؟ ج: لا. لا تنخفض كفاءة الربط/التحويل إذا تم حفظ تفاعلات الربط في درجة حرارة الغرفة أو عند 4 درجات مئوية لبضع دقائق. لا نوصي بفترات حضانة أطول من ساعة واحدة. إذا لم يتم استخدام الحمض النووي للتحويل خلال ساعة واحدة، نوصي بتخزينه عند -20 درجة مئوية. س: هل يمكن استخدام تفاعل الربط الناتج عن مزيج Instant Sticky-end Ligase Master Mix مباشرةً لتحويل الخلايا المؤهلة كهربائيًا؟ ج: لا. لا نوصي باستخدام تفاعلات الربط التي تحتوي على مزيج Instant Sticky-end Ligase Master Mix لتحويل الخلايا المؤهلة كهربائيًا. يجب تنقية الحمض النووي قبل استخدامه في التحويل الكهربائي. س: الحجم الموصى به لتفاعل مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة هو 10 ميكرولتر. أفضل إجراء تفاعلات الربط بحجم 20 ميكرولتر. هل يمكنني زيادة حجم التفاعل؟ ج: نعم. طالما أن تركيز مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة في التفاعل هو 1X (أو 50% من إجمالي حجم التفاعل)، يمكنك زيادة حجم تفاعل الربط. س: أستخدم عادةً أكثر من 5 ميكرولتر من تفاعلات الربط لتحويل 50 ميكرولتر من الخلايا المؤهلة. عندما أفعل ذلك باستخدام مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة، تحتوي أطباق التحويل على عدد قليل جدًا من المستعمرات. ما المشكلة برأيك؟ ج: لا نوصي باستخدام أكثر من 5 ميكرولتر من تفاعلات الربط باستخدام مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة لتحويل 50 ميكرولتر من الخلايا المؤهلة. في بعض الحالات، لاحظنا انخفاضًا في كفاءة التحويل عند استخدام أكثر من 5 ميكرولتر من تفاعل الربط باستخدام مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة. يجب ربط الحمض النووي ذي النهايات المتوافقة والسليمة والموجودة بالكميات المحددة في البروتوكول باستخدام مزيج الربط الفوري ذي النهايات اللاصقة. لا يلزم استخدام أكثر من 5 ميكرولتر في تفاعل التحويل القياسي. س: هل يمكن استخدام مزيج الربط الفوري ذي النهايات اللاصقة لربط شظايا الحمض النووي ذات النهايات غير اللاصقة أو ذات القاعدة الواحدة المتدلية؟ ج: نعم، ولكن التفاعل لن يكون فوريًا. يلزم فترة حضانة من 15 إلى 30 دقيقة في درجة حرارة الغرفة لضمان كفاءة عالية في ربط النهايات غير اللاصقة أو ذات القاعدة الواحدة المتدلية. س: تجمد مزيج الربط الفوري ذي النهايات اللاصقة في المجمد. هل هذه مشكلة؟ ج: لا. لقد اختبرنا ثبات المنتج بعد التجميد. أكد اختبار الذوبان الحر أن الأداء بعد 20 دورة تجميد/ذوبان قريب من أداء المزيج السائل الأصلي. إذا تجمد المنتج في المجمد، فمن المحتمل أن تكون درجة الحرارة الداخلية أقل من -20 درجة مئوية المتوقعة. س: يشير بروتوكول مزيج الربط الرئيسي الفوري ذو النهاية اللاصقة إلى أنه لا ينبغي تعطيل التفاعل بالحرارة. كيف يمكنني تعطيل نشاط الربط؟ ج: عادةً لا توجد حاجة لتعطيل تفاعلات الربط ذات النهاية اللاصقة. يمكن استخدام التفاعل مباشرةً للتحويل باستخدام خلايا مؤهلة كيميائيًا، أو يمكن تنقية الحمض النووي عن طريق الترسيب بالإيثانول، أو التنقية بالهلام، أو أي عمود أو خرز مناسب لتنقية الحمض النووي لفصل ناتج الربط عن نشاط الإنزيم ومكونات التفاعل الأخرى. إذا كنت ترغب في إيقاف التفاعل دون تنقية، يمكنك إضافة حجم مساوٍ من EDTA بتركيز 50 ملي مولار والخلط باستخدام الماصة، ومع ذلك، سيتداخل هذا مع التفاعلات اللاحقة التي تتطلب المغنيسيوم أو كاتيونات ثنائية التكافؤ أخرى.
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924