نيو إنجلاند بيولابس، M0458S، ليغاز RtcB

الفئات ذات الصلة: تطبيقات ربط الحمض النووي الريبوزي، مواصفات استنساخ الحمض النووي الريبوزي ، شروط التفاعل: محلول تفاعل RtcB بتركيز 1X، مُضاف إليه 0.1 ملي مولار من GTP و1 ملي مولار من MnCl2، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل RtcB بتركيز 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 75 ملي مولار KCl، 3 ملي مولار MgCl2، 10 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 8.3 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 50 ملي مولار NaCl، 10 ملي مولار Tris-HCl، 0.1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: هل يؤثر التركيب الثانوي على الربط بواسطة إنزيم RtcB Ligase؟ ج: نعم. يتطلب إنزيم RtcB Ligase أن يكون الطرف 3' من الحمض النووي الريبوزي المانح أحادي السلسلة لكي يتم الربط بكفاءة. الركائز ثنائية السلسلة أو قليل النوكليوتيدات المُقسِّم ستمنع الربط. س: هل يستطيع إنزيم RtcB Ligase ربط الحمض النووي DNA؟ ج: نعم. أظهرت الدراسات المنشورة والاختبارات الداخلية أن إنزيم RtcB Ligase قادر على ربط مانحي الحمض النووي DNA بمستقبلاته، أو مانحي الحمض النووي الريبي RNA بمستقبلاته، وإن كان ذلك بكفاءة أقل. تنطبق نفس القيود الهيكلية على ركائز الحمض النووي DNA كما تنطبق على ركائز الحمض النووي الريبي RNA. س: ما هي درجة حرارة التفاعل المثلى لإنزيم RtcB Ligase؟ ج: درجة حرارة التفاعل المثلى لإنزيم RtcB Ligase هي 37 درجة مئوية. س: هل يمكن استخدام إنزيم RtcB Ligase في محاليل NEBuffer أخرى؟ ج: بينما يكون إنزيم RtcB Ligase نشطًا على النحو الأمثل في المحلول المنظم المرفق، فإنه يكون نشطًا أيضًا في محلولي NEBuffer 3 و1 بنسبة 30% و10% على التوالي. يتطلب استخدام هذين المحلولين إضافة 0.1 ملي مولار من GTP و1 ملي مولار من MnCl2. س: كيف يمكنني زيادة كفاءة الربط؟ ج: سيؤدي تمديد وقت الربط أو إضافة المزيد من الإنزيم إلى زيادة كفاءة الربط. س: هل يمكن استبدال المغنيسيوم، أو أي كاتيون ثنائي التكافؤ آخر، بالمنغنيز؟ ج: لا. يتطلب نشاط إنزيم RtcB Ligase وجود المنغنيز تحديدًا، ولا يمكن استبداله بأي كاتيون ثنائي التكافؤ آخر. س: هل يُحسّن البولي إيثيلين جلايكول (PEG) كفاءة الربط؟ ج: في ظل الظروف الموصى بها، لا يُقدّم PEG8000 أي فائدة عند استخدام كميات متساوية من الليغاز والركيزة. عندما تكون الركيزة أكثر من الإنزيم، فإن إضافة 15% من PEG8000 تُحسّن كفاءة الربط إلى أقصى حد. س: هل يُمكنني شراء كميات كبيرة من أحد إنزيمات الابتكار الموجودة؟ ج: نعم، إذا كنت بحاجة إلى كميات كبيرة من أحد إنزيمات الابتكار، يُرجى التواصل مع شركة NEB عبر البريد الإلكتروني EnzymesForInnovation@neb.com. يُرجى ملاحظة أنه قد يكون هناك توافر محدود، وبالتالي قد تطول فترات التسليم للطلبات الكبيرة. قد يكون من الضروري أيضًا إجراء اختبارات إضافية لمراقبة الجودة لتلبية احتياجاتك وتطبيقاتك الخاصة. س: ما هي إنزيمات الابتكار؟ أ: مشروع "إنزيمات الابتكار" (EFI) هو مشروع أطلقته شركة NEB لتزويد المجتمع العلمي بإنزيمات فريدة، بهدف تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص فريدة وتخصصات مميزة غير متوفرة تجاريًا في أي مكان آخر، وبجودة عالية تليق بسمعة NEB. تُعتبر الإنزيمات التي انتقلت من مرحلة التطبيقات غير المعروفة أو الاستكشافية إلى التطبيقات الأساسية في مشروع "إنزيمات الابتكار" نتاجًا لهذه الجهود. إذا كانت لديكم فكرة عن "إنزيم للابتكار" مع تطبيق مقترح قد يكون مفيدًا، يُرجى مراسلتنا عبر البريد الإلكتروني EnzymesForInnovation@neb.com. لمزيد من المعلومات، يُرجى مشاهدة الفيديو.