مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M0526S، Sce PUS1

هذا تصنيف ذو صلة: تحليل الإبيترانسكريبتوم، مواصفات تعديل الحمض النووي الريبوزي (RNA). شروط التفاعل: حضانة عند 30 درجة مئوية باستخدام محلول NEBuffer™ r1.1 بتركيز 1X، 10 ملي مولار من ثنائي-تريس-بروبان-هيدروكلوريد، 10 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7 عند 25 درجة مئوية). تعطيل حراري عند 55 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما تأثير تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg2+) على نشاط Sce PUS1؟ ج: بالنسبة لبعض قوالب الحمض النووي الريبوزي (RNA)، وجدنا أن غياب أيونات المغنيسيوم (Mg2+) في محلول التفاعل قد يكون له تأثير محفز على نشاط Sce PUS1، بينما قد يكون له تأثير مثبط على قوالب أخرى. في قوالب أخرى من الحمض النووي الريبوزي (RNA)، قد يكون وجود أيونات المغنيسيوم (Mg2+) ضروريًا لنشاط Sce PUS1 الفعال. س: كيف يمكن تحسين نشاط Sce PUS1 عند استخدام تراكيز منخفضة من الحمض النووي الريبوزي (RNA)؟ س: هل إضافة 10% من بولي إيثيلين جلايكول 300 قد تُحسّن نشاط إنزيم Sce PUS1؟ ج: قد تُحسّن إضافة 10% من بولي إيثيلين جلايكول 300 نشاط إنزيم Sce PUS1، خاصةً عند استخدام تراكيز منخفضة من الحمض النووي الريبي. س: ما تأثير كلوريد المنغنيز (MnCl2) على نشاط إنزيم Sce PUS1؟ ج: يُثبّط كلوريد المنغنيز (MnCl2) نشاط إنزيم Sce PUS1 عند تراكيز أعلى من 1 ملي مولار. س: ما تأثير تركيز كلوريد الصوديوم (NaCl) على نشاط إنزيم Sce PUS1؟ ج: إنزيم Sce PUS1 حساس لكلوريد الصوديوم؛ فالتراكيز التي تزيد عن 50 ملي مولار تُثبّط نشاطه. س: هل يُمكن لإنزيم Sce PUS1 تعديل أكثر من 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي في تفاعل واحد؟ ج: اعتمادًا على الركيزة، قد يكون من الضروري إضافة إنزيم Sce PUS1 لتحويل أكثر من 1 ميكروغرام من الحمض النووي الريبي. مع ذلك، نوصي بإجراء تفاعلات متعددة تحتوي على أقل من 1 ميكروغرام لضمان كفاءة أعلى. س: هل يُمكنني زيادة أو تقليل حجم تفاعل إنزيم Sce PUS1؟ ج: لاحظنا انخفاضًا في نشاط إنزيم Sce PUS1 في أحجام التفاعل الأصغر أو الأكبر من 100 ميكرولتر. لذا، نوصي بحجم تفاعل لا يقل عن 100 ميكرولتر، واستخدام تفاعلات متعددة بحجم 100 ميكرولتر في حال الحاجة إلى زيادة حجم التفاعل لاستيعاب كمية إضافية من الركيزة. س: هل يمكنني تقصير أو إطالة فترة حضانة إنزيم Sce PUS1 مع الحمض النووي الريبي المستهدف؟ ج: وجدنا أن معظم اليوريدينات المستهدفة بواسطة إنزيم Sce PUS1 تتحول إلى يوريدينات كاذبة بعد ساعتين من الحضانة. مع ذلك، قد تتحول المواقع المستهدفة المفضلة بعد فترات حضانة أقصر. اعتمادًا على الركيزة، يمكن أن تؤدي الحضانة لأكثر من ساعتين إلى زيادة نسبة تحويل اليوريدين إلى يوريدين كاذب. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.