نيو إنجلاند بيولابس، M0527S، إكسونوكلياز Msz I

الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونوكليازات غير النوعية. تعريف الوحدة: تُعرَّف وحدة واحدة من إكسونوكلياز Msz I بأنها كمية الإنزيم التي تحفز إطلاق 5 نانومول من النيوكليوتيد القابل للذوبان في الأحماض في حجم تفاعل إجمالي قدره 100 ميكرولتر خلال 15 دقيقة عند 55 درجة مئوية في محلول rCutSmart المخفف 1X. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ المخفف 1X، حضانة عند 55 درجة مئوية، محلول rCutSmart™ المخفف 1X، 50 ملي مولار من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار من أسيتات التريس، 10 ملي مولار من أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية) ، تعطيل حراري عند 80 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نطاق درجة حرارة التفاعل الأمثل لنشاط إكسونوكلياز Msz I؟ ج: يكون إنزيم Msz Exonuclease I أكثر نشاطًا عند درجة حرارة تتراوح بين 50 و58 درجة مئوية. لا يُنصح باستخدامه عند درجات حرارة أقل من 45 درجة مئوية أو أعلى من 60 درجة مئوية. س: هل يمكن لإنزيم Msz Exonuclease I إزالة البادئات في تفاعلات PCR المتداخلة؟ ج: نعم، أضف 1 ميكرولتر من إنزيم Msz Exonuclease I إلى الجولة الأولى من نواتج PCR (حتى 20 ميكرولتر) واحضن التفاعل عند 55 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة، ثم عند 80 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة لتعطيل الإنزيم. بعد ذلك، يمكن إضافة مجموعات جديدة من البادئات، ثم إجراء جولة ثانية من PCR لتقليل نواتج تضخيم PCR غير النوعية. س: هل يمكن استخدام إنزيم Msz Exonuclease I لتعديل نهايات الحمض النووي المزدوج (dsDNA)؟ ج: لا. نهايات الحمض النووي المفرد (ssDNA) القصيرة ليست ركيزة له. استخدم بوليميراز الحمض النووي الأول، جزء كلينو الكبير (NEB# M0210) لملء النتوءات 5′ وإزالة النتوءات 3′، أو استخدم نوكلياز فول المونج (NEB# M0250) لإزالة النتوءات 3′ أو 5′. ملاحظة: لا يمكن ملء النتوءات 3′. س: هل يمكن تعطيل إكسونوكلياز Msz الأول بالحرارة؟ ج: نعم. عطّل الإنزيم بالحرارة عند 80 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة. س: هل يمكن استخدام إكسونوكلياز Msz الأول مع إكسونوكلياز مزدوج السلاسل لتنظيف مستحضرات البلازميد؟ ج: لا يُنصح بذلك. أفضل إنزيم لتنظيف تلوث الحمض النووي الجينومي في مستحضرات البلازميد هو إكسونوكلياز V (RecBCD، NEB #M0345). س: هل يعمل إكسونوكلياز Msz الأول في محاليل منظمة أخرى؟ ج: نعم. معظم محاليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) متوافقة. لا حاجة إلى محلول تفاعل إضافي عند إضافة الإنزيم إلى تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). أدى التحضين في المحاليل التالية عند 55 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة إلى النشاط النسبي المذكور: محلول NEBuffer % النشاط r1.1 (NEB# B7030) 20 r2.1 (NEB# B6002) 50 r3.1 (NEB# B6003) 50 rCutSmart™ (NEB# B6004) 100 محلول تفاعل إكسونوكلياز I (NEB# B0293) 10 ThermoPol (NEB# B9004) 90