نيو إنجلاند بيولابس، M0543L، مزيج NEBNext® Q5® Hot Start HiFi PCR Master Mix

الفئات ذات الصلة: الخلطات الرئيسية، تطبيقات تحضير مكتبات التسلسل من الجيل التالي، بوليميرازات تحضير مكتبات التسلسل من الجيل التالي، تفاعل البوليميراز المتسلسل ذو البداية الساخنة، تفاعل البوليميراز المتسلسل السريع، المواصفات : تعطيل حراري، لا توجد أسئلة شائعة : س: ما الجديد في خلطة NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR الرئيسية؟ ج: تم تحسين خلطة NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR الرئيسية لزيادة إنتاجية تفاعل البوليميراز المتسلسل أثناء تضخيم مكتبات التسلسل من الجيل التالي. طبيعتها القائمة على الأبتامر والبداية الساخنة تجعلها مثالية للأتمتة، وهي متوافقة مع العديد من الخرزات المغناطيسية الكربوكسيلية والتوسيلية والستربتافيدينية التي تُستخدم غالبًا في سير عمل التسلسل من الجيل التالي. س: ما أنواع الخرزات التي يمكن استخدامها مع خلطة NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR الرئيسية؟ ج: يمكن استخدام مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix في عمليات تتضمن خرزات مغناطيسية كربوكسيلية مثل Agencourt® AMPure® XP (شركة Beckman Coulter)، وSera-Mag™ SpeedBeads™ (شركة GE Healthcare Life Sciences)، وMag-Bind® RXNPure (شركة Omega Bio-tek)، بالإضافة إلى خرزات ستربتأفيدين كربوكسيلية مثل Dynabeads® MyOne™ Streptavidin C1 وDynabeads® M-270 Streptavidin (شركة Life Technologies). كما يمكن استخدامه مع خرزات ستربتأفيدين توسيلية مثل Dynabeads® MyOne™ Streptavidin T1 وDynabeads® Streptavidin M-280 (شركة Life Technologies). ونظرًا لاختلاف الشركات المصنعة للخرزات وعدم الإفصاح دائمًا عن تركيزاتها، نوصي بتقليل كمية الخرزات المستخدمة في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) قدر الإمكان. س: هل مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix هو نفسه مزيج Q5® Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix (M0494)؟ ج: لا. على الرغم من احتواء كلا المزيجين على إنزيم Q5 Hot Start High-Fidelity DNA Polymerase، إلا أن تركيب المزيجين مختلف. تم تحسين مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix خصيصًا لتضخيم مكتبات NGS بكفاءة عالية، بينما تم تحسين مزيج Q5 Hot Start High-Fidelity 2X Master Mix لتضخيم مجموعة متنوعة من القوالب، بما في ذلك القطع المضخمة الأطول. س: هل مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix هو نفسه مزيج NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)؟ ج: لا. على الرغم من احتواء كلا المزيجين على إنزيم Q5 High-Fidelity DNA Polymerase، إلا أن تركيب المزيجين مختلف. تم تحسين مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix خصيصًا لتضخيم مكتبات NGS بكفاءة عالية، سواءً بوجود أو غياب الخرز المغناطيسي، كما أن خاصية بدء التشغيل السريع تجعله مثاليًا لسير العمل الذي يتضمن التشغيل الآلي. س: هل مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix هو نفسه مزيج NEBNext® High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0541)، أو مزيج Q5 Hot Start High-Fidelity 2X PCR Master Mix (M0494)؟ ج: لا. على الرغم من أن جميع الخلطات الرئيسية الثلاث تحتوي على بوليميراز الحمض النووي Q5 عالي الدقة، إلا أن مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix هو الوحيد الذي تم تحسينه خصيصًا لتضخيم قوي للغاية مع تحيز منخفض. تمنحه خاصية بدء التشغيل السريع وقدرته على التضخيم بوجود الخرز المغناطيسي مزايا على سابقه، مزيج NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix، في تطبيقات NGS. يحتوي مزيج Q5 Hot Start High-Fidelity 2X PCR Master Mix أيضًا على الأبتامر ذي البدء الساخن لتسهيل الإعداد في درجة حرارة الغرفة، ولكنه مُحسَّن لتضخيم مجموعة متنوعة من القوالب، بما في ذلك المُضخَّمات الأطول. س: هل أحتاج إلى إجراء أي تغييرات على ظروف دورات التضخيم لمكتبة NGS التي كنت أستخدمها سابقًا مع مزيج Phusion High-Fidelity PCR Master Mix؟ ج: نعم. تختلف ظروف دورات التضخيم لمزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix عن تلك الموصى بها لمزيج Phusion High-Fidelity PCR Master. تم تحسين مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix لتضخيم قوي ومنخفض التحيز لمكتبات NGS. نوصي باستخدام درجة حرارة تمديد تبلغ 65 درجة مئوية لهذا التطبيق. يُرجى الرجوع إلى الإرشادات الواردة في كتيبات منتجات مجموعة NEBNext لمزيد من التفاصيل. س: كم عدد دورات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) التي يجب أن أقوم بها باستخدام مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix؟ ج: يعتمد ذلك على كمية المدخلات. للاستخدام مع مجموعات NEBNext، يُرجى الرجوع إلى الإرشادات المرفقة في كتيبات المنتج. س: هل منتجات الحمض النووي الناتجة عن مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix ذات نهايات غير لاصقة أم أنها تحتوي على قاعدة واحدة بارزة بطول 3'؟ ج: كما هو الحال مع جميع منتجات Q5، ينتج مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix نهايات غير لاصقة. س: ماذا أفعل إذا لاحظتُ ترسبًا في مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix؟ ج: قد يتكون راسب عند إذابة مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix. لضمان الأداء الأمثل، اترك المزيج الرئيسي حتى يصل إلى درجة حرارة الغرفة. بمجرد إذابته، اخلطه برفق عن طريق قلب الأنبوب عدة مرات. س: ما هي مزايا استخدام مزيج NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix؟ ج: يوفر مزيج NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix مزيجًا فريدًا من الدقة الفائقة والتضخيم القوي لمكتبات NGS، بغض النظر عن محتوى GC. كما أنه يُعطي إنتاجية تفاعل PCR أعلى من سابقه، NEBNext High-Fidelity 2X PCR Master Mix. بالإضافة إلى ذلك، وبفضل خاصية البدء السريع، يُعد NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix مثاليًا لسير العمل الذي يتضمن الأتمتة. وهو متوافق مع مجموعة متنوعة من الخرزات الكربوكسيلية والتوسيلية والستربتافيدينية التي يمكن نقلها أو تضمينها في خطوة تفاعل PCR لبروتوكولات بناء المكتبة. س: هل يتضمن NEBNext® Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix جزيئات dUTP؟ ج: لا. لا يتضمن NEBNext Q5 Hot Start HiFi PCR Master Mix جزيئات dUTP، وهو غير متوافق مع الحمض النووي المعالج بالبيسلفيت. بالنسبة للبروتوكولات التي تستخدم الحمض النووي المعالج بالبيسلفيت، يمكن استخدام إنزيم EpiMark™ Hot Start DNA Polymerase.