Product Description
الفئات ذات الصلة: الخلطات الرئيسية، تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، وتقنيات التضخيم. التطبيقات: تفاعل البوليميراز المتسلسل عالي الدقة، تضخيم الحمض النووي، تفاعل البوليميراز المتسلسل وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي، مواصفات تفاعل البوليميراز المتسلسل. المواد المطلوبة (غير متوفرة) : أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل لجهاز التدوير الحراري. الأسئلة الشائعة : س: كيف أحدد درجة حرارة التلدين المناسبة لتفاعلي؟ ج: يمكن تحديد درجة حرارة التلدين المثلى (Ta) لزوج البادئات تجريبيًا عن طريق إجراء تفاعل البوليميراز المتسلسل المتدرج. يُرجى استخدام حاسبة درجة حرارة التلدين (Tm) من NEB لتحديد درجة حرارة التلدين الأولية لزوج البادئات وبوليميراز/محلول NEB المستخدم. على عكس الحاسبات الأخرى، تأخذ حاسبة درجة حرارة التلدين من NEB في الاعتبار مكونات المحلول التي تؤثر على درجات حرارة الانصهار والملاحظات التجريبية عند حساب درجة حرارة التلدين المثلى. قد تقلل الحاسبات الأخرى عبر الإنترنت من تقدير أفضل درجة حرارة تلدين لبوليميراز Q5. للحصول على مزيد من المعلومات حول استخدام درجة حرارة تلدين واحدة (أي "عالمية")، يُرجى الاطلاع على مذكرتنا التطبيقية: درجة حرارة التلدين العالمية في تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتأثيرها على نتائج التضخيم. يُعد تفاعل البوليميراز المتسلسل الفعال عملية توازن ديناميكية بين المواد الكيميائية والمتفاعلات التي تُعزز التفاعل النوعي للبادئ مع مُكمله في القالب عند درجة حرارة التلدين المُختارة. بينما تُعد درجات حرارة التلدين قيمًا ثابتة يختارها الباحث، إلا أن درجات حرارة الانصهار بين كل بادئ والقالب قد تختلف من مُنتج تضخيم إلى آخر. ملاحظة: يتناول هذا القسم تحديدًا تلدين بادئ أوليغونوكليوتيد مع قالب الحمض النووي. خلال خطوة التمسخ في تفاعل البوليميراز المتسلسل، تعمل درجة الحرارة العالية على فصل قالب الحمض النووي ثنائي السلسلة (dsDNA) إلى حمض نووي أحادي السلسلة (ssDNA)، مما يكشف عن تسلسلات نيوكليوتيدية معقدة تسمح بتلدين (ارتباط، تهجين، اقتران) بادئ أوليغونوكليوتيد أحادي السلسلة مُكمل عند درجة حرارة أقل. درجة حرارة التلدين (TA) هي درجة الحرارة المستخدمة خلال خطوة تلدين البادئات في تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR)، وتعتمد على درجة حرارة انصهار البادئات. درجة حرارة انصهار البادئة (TM) هي درجة الحرارة التي يرتبط عندها 50% من البادئة بمكملها المثالي، بينما يبقى 50% منها حرًا في المحلول نتيجة انفصاله ("انصهاره") عن مكمله. لماذا يُعد استخدام درجة حرارة التلدين الصحيحة أمرًا بالغ الأهمية لنجاح تفاعل البلمرة المتسلسل؟ عادةً ما تكون درجة حرارة التلدين أقل من درجة حرارة الانصهار لضمان تهجين البادئات مع القالب. إذا كانت درجة حرارة التلدين مرتفعة جدًا، فلن ترتبط البادئة بالقالب ولن تتم عملية التضخيم. أما إذا كانت درجة حرارة التلدين منخفضة جدًا، فقد يحدث ارتباط غير نوعي للبادئة (أو البادئات) بالقالب أو ببعضها البعض (ثنائيات البادئات)، مما يؤدي إلى: زيادة احتمالية تكوين نواتج غير نوعية، وانخفاض تكوين الناتج المطلوب نتيجة لظروف تفاعل غير فعالة. تؤثر متفاعلات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على درجة انصهار البادئات ودرجة حرارة التلدين. لا تُعدّ درجات الانصهار قيمًا ثابتة في تفاعل PCR، بل تتأثر بعدة عوامل، منها: طول البادئات ونسبة الجوانين والسيتوزين إلى الأدينين والثايمين (نسبة محتوى GC). يحدد طول البادئات مقدار الروابط الهيدروجينية بين البادئة ومكملها. فكلما زادت الروابط الهيدروجينية (ارتفاع درجة الانصهار) بين البادئة والقالب، زادت الطاقة اللازمة لكسر هذه الروابط (ارتفاع درجة الحرارة). تركيز البادئات: تُحدد درجة انصهار البادئات في تفاعل PCR بواسطة نوع الحمض النووي الموجود بوفرة مولية، والذي ينبغي أن يكون البادئات. المغنيسيوم والنيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات (dNTPs): يحدد التركيز الحر لأيونات المغنيسيوم [Mg2+] درجة انصهار الحمض النووي المزدوج، ولكن يمكن للمغنيسيوم أن يُحتجز بواسطة متفاعلات ونواتج تفاعل PCR. تعمل الشحنة الموجبة للمغنيسيوم على استخلاب الفوسفات سالبة الشحنة في النيوكليوتيدات ثلاثية الفوسفات والبادئات والحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA). يؤدي تقليل التنافر الكهروستاتيكي (بين البادئ وفوسفات الحمض النووي أحادي السلسلة) إلى زيادة تركيز الكاتيونات أحادية التكافؤ (Na+، K+) في البادئ. تدعم الكاتيونات أحادية التكافؤ استقرار الحمض النووي المزدوج، على غرار أيونات المغنيسيوم. تتنافس الكاتيونات أحادية التكافؤ وأيونات المغنيسيوم على الارتباط بالحمض النووي. يؤدي زيادة تركيز الكاتيونات أحادية التكافؤ إلى تقليل ارتباط المغنيسيوم بالحمض النووي. س: ما هي ميزة استخدام Q5 Quick-Load™؟ ج: تسمح منتجات Q5 Quick-Load™ بتحميل ناتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) مباشرةً على هلامات الحمض النووي مع الحفاظ على نفس أداء خلطات Q5 Master Mix الأخرى. علاوة على ذلك، يُبسط Q5 Quick-Load™ الخطوات التجريبية ويقلل من المواد الاستهلاكية المخبرية المستخدمة في تحضير هلامات الفصل الكهربائي (مثل رؤوس الرحلان الكهربائي والصفائح). س: ما هي الأصباغ الموجودة في Q5 Quick-Load™؟ ج: تحتوي منتجات Q5 Quick-Load™ على صبغتين مختلفتين (أصفر وأزرق) تؤديان وظيفتين للمراقبة أثناء عملية الفصل الكهربائي. يتزامن الصبغ الأزرق مع قطع الحمض النووي (DNA) التي يتراوح طولها بين 3 و5 كيلوبايت في هلام الأغاروز بنسبة 1%. أما الصبغ الأصفر فيتقدم على قطع الحمض النووي التي يقل طولها عن 50 زوجًا قاعديًا، مما يسمح بمراقبة وتقييم قطع الحمض النووي الأصغر حجمًا بكفاءة، بما في ذلك البادئات. ويبلغ طول موجة الإثارة للصبغ الأزرق 615 نانومتر، وللصبغ الأصفر 421 نانومتر. س: هل تتداخل أصباغ التتبع الموجودة في Q5 Quick-Load™ مع التطبيقات اللاحقة؟ ج: تحتوي منتجات Q5 Quick-Load على صبغتين مختلفتين (أصفر وأزرق) متوافقتين مع التطبيقات اللاحقة مثل تسلسل الحمض النووي، والربط، والهضم الإنزيمي. بالنسبة للتطبيقات التي تتطلب تحليل نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) عن طريق الامتصاص أو التألق، نوصي باستخدام النسخ عديمة اللون من المنتجات (NEB #M0492 وNEB #M0494) أو تنقية نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل أولًا. يُنصح باستخدام مجموعة Monarch PCR & DNA Cleanup Kit (NEB #T1130) لهذه المهمة، حيث تزيل الصبغة مع الحفاظ على الحمض النووي سليمًا لتحليله لاحقًا. كما يُنصح باستخدام مجموعة Exo-CIP™ Rapid PCR Cleanup Kit (NEB #E1050) لتنظيف تفاعلات PCR بكفاءة.
Order Guidelines
1. Price & Stock Available on Request. Click to send email to: service@iright.com
2. Please DO NOT make payment before confirmation.
3. Minimum order value of $1,000 USD required.
Collaboration
Tony Tang
Email: Tony.Tang@iright.com
Mobile/WhatsApp/Wechat: +86-17717886924