نيو إنجلاند بيولابس، M0603S، ميثيل ترانسفيراز EcoGII

متوفر بتركيز أعلى. يرجى الاطلاع على الفئات ذات الصلة: ميثيل ترانسفيرازات لعلم التخلق، إنزيمات تعديل القواعد. المواصفات : تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لحماية 100 نانوغرام من الحمض النووي المزدوج الموسوم بـ FAM في 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر من الانقسام بواسطة إنزيم القطع MboI. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، مُضاف إليه 160 ميكرومول من S-أدينوسيل ميثيونين (SAM). يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مول من أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مول من أسيتات التريس، 10 ملي مول من أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المُعاد تركيبه (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مول من Tris-HCl، 250 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 1 ملي مول من DTT، 0.1 ملي مول من EDTA، 0.15% من Triton® X-100، 180 ميكروغرام/مل من BSA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. شروط فحص الوحدة: يُحضن إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز مع 100 نانوغرام يُحضّر محلول ركيزة الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين ثنائي السلسلة (dsDNA) الموسومة بـ FAM (80 زوجًا قاعديًا) في 20 ميكرولتر من محلول rCutSmart Buffer بتركيز 1X مُضافًا إليه 160 ميكرومول من SAM، لمدة 30 دقيقة عند 37 درجة مئوية، تليها 10 دقائق عند 65 درجة مئوية. يُحدد مدى الحماية بإضافة 5 وحدات من إنزيم القطع MboI (حضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة، ثم 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة)، يليها تحليل الفصل الكهربائي الشعيري لفصل نواتج التفاعل، وتحديد الأنواع المقطوعة وغير المقطوعة، وقياس وفرتها. سؤال وجواب : س: هل تعمل أي من إنزيمات ميثيل ترانسفيراز (ميثيلاز) من شركة NEB على الحمض النووي الريبوزي (RNA)؟ ج: نعم، يُنتج إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII (NEB #M0603) ما بين 5-10% من بقايا الأدينوزين الميثيلية على ركائز الحمض النووي الريبوزي. مع ذلك، لا تُنتج إنزيمات الميثيل ترانسفيراز الأخرى هذه البقايا. يرجى الملاحظة: قامت شركة NEB باختبار ناقلات/ميثيلازات (MT) التالية: ناقل ميثيل dam (NEB #M0222)، ناقل ميثيل AluI (NEB #M0220)، ناقل ميثيل BamHI (NEB #M0223)، ناقل ميثيل M.SssI (NEB #M0226)، ناقل ميثيل EcoRI (NEB #M0211)، ناقل ميثيل M.CviPI (NEB #M0227)، ناقل ميثيل HaeIII (NEB #M0224)، ناقل ميثيل HhaI (NEB #M0217)، ناقل ميثيل HpaII (NEB #M0214)، ناقل ميثيل MspI (NEB #M0215) وناقل ميثيل TaqI (NEB #M0219) باستخدام محاليل التفاعل المرفقة على ركيزتين: 1) تم استخدام 1) mRNA مُستنسخ في المختبر يُشفّر إنزيم لوسيفيراز اليراعة (1 ميكروغرام) و2) RNA الكلي من خلايا هيلا (250 نانوغرام). حُضنت كل ركيزة مع كميتين من الإنزيم (1 و5 ميكرولتر) لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية (65 درجة مئوية لإنزيم Taq I MT)، ثم نُقّيت باستخدام عمود طرد مركزي، وهُضمت إلى نيوكليوسيدات منفردة باستخدام مزيج من الإنزيمات، وحُللت بتقنية LC/MS لتحديد البقايا المُعدّلة وغير المُعدّلة. لم يتمكن أي من إنزيمات الميثيلاز التي تم فحصها من نقل مجموعة ميثيل إلى ركائز RNA المدروسة. س: ما هو نشاط إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز عند درجات حرارة أخرى غير 37 درجة مئوية؟ ج: 4°م = 25%، 16°م = 25%، 25°م = 50%، 30°م = 100%، 37°م = 100%، 42°م = 100%، 50°م = 50%. س: هل يُرفق S-أدينوسيل ميثيونين (SAM) مع إنزيم ميثيل ترانسفيراز؟ ج: نعم، يُرفق محلول مركز بتركيز 32 ملي مولار. ويمكن طلبه بشكل منفصل كمنتج رقم NEB# B9003S. يُعد SAM المكون الأكثر حساسية في التفاعل. يجب استبدال المحلول المركز إذا تجاوز عمره 9 أشهر. س: هل يتطلب إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII وجود BSA؟ ج: لا، لا يتطلب إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII وجود BSA أو الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin). س: هل يتطلب إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII وجود MgCl2؟ ج: لا، لا يتطلب إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII وجود MgCl2. س: ما هو نشاط إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII في محاليل منظمة أخرى؟ ج: محلول NEBuffer r1.1 = 75%، محلول NEBuffer r2.1 = 100%، محلول NEBuffer r3.1 = 50%، محلول rCutSmart Buffer = 100%. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII؟ ج: الوزن الجزيئي 40151 دالتون. س: هل يمكن تعطيل إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII بالحرارة؟ ج: نعم، يمكن تعطيله بالحرارة عند 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. س: هل إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII حساس للملح؟ ج: نعم، إنزيم ميثيل ترانسفيراز EcoGII حساس للملح. تأكد من أن محلول الحمض النووي منخفض التركيز الملحي أو أنه يشكل نسبة صغيرة فقط من حجم التفاعل النهائي. إذا كان الملح يمثل مشكلة، قلل تركيز الملح عن طريق التقطير الغشائي. س: هل يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA)؟ ج: نعم، يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة ديوكسي أدينوزين الموجود في جزيئات الحمض النووي أحادي السلسلة. س: هل يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة هجائن الحمض النووي/الرنا (DNA/RNA)؟ ج: على الرغم من إمكانية تعديل بقايا الأدينين الموجودة في سلسلة الرنا (RNA)، إلا أن إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز يُفضل تعديل بقايا الأدينين الموجودة في سلسلة الحمض النووي (DNA) لجزيء هجين الحمض النووي/الرنا. يُرجى مراجعة الجدول في صفحة وصف المنتج لمزيد من التفاصيل حول مستويات مثيلة الركائز المختلفة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز. س: هل يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة الحمض النووي الجينومي (gDNA)؟ ج: نعم، يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة الحمض النووي الجينومي. يُرجى مراجعة الجدول في صفحة وصف المنتج لمزيد من التفاصيل حول مستويات مثيلة الركائز المختلفة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز. س: هل يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة الحمض النووي الريبي (RNA)؟ ج: نعم، يقوم إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز بمثيلة الأدينين الموجود في جزيئات الحمض النووي الريبي (RNA)، ولكن بدرجة أقل من الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين (DNA). يُرجى مراجعة الجدول في صفحة وصف المنتج لمزيد من التفاصيل حول مستويات مثيلة الركائز المختلفة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز. س: هل تمنع مثيلة EcoGII إنزيمات القطع؟ ج: تمنع مثيلة EcoGII العديد من إنزيمات القطع التي تتعرف على التسلسلات التي تحتوي على قواعد dA. يُرجى مراجعة الجدول في صفحة وصف المنتج لمزيد من التفاصيل حول مستويات مثيلة الركائز المختلفة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز. س: كيف يمكنني زيادة مثيلة الركيزة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز؟ ج: مادة SAM غير مستقرة عند درجة حموضة 7.5 ودرجة حرارة 37 درجة مئوية. بالنسبة للتفاعلات الممتدة، يمكن أن تؤدي إضافة المزيد من SAM بعد 4 ساعات إلى تحسين النتائج. مع ذلك، تتأثر تفاعلات المثيلة بشكل كبير أيضًا بـ S-أدينوزيل هوموسيستين. يرتبط S-أدينوزيل هوموسيستين، وهو ناتج ثانوي لتفاعل المثيلة، بالميثيلازات بقوة أكبر من SAM. يؤدي تثبيط S-أدينوزيل هوموسيستين إلى تقليل معدل التفاعل بشكل كبير مع مرور الوقت. يُرجى مراجعة الجدول في صفحة وصف المنتج لمزيد من التفاصيل حول مستويات مثيلة الركائز المختلفة بواسطة إنزيم EcoGII ميثيل ترانسفيراز. س: هل يُمكنني شراء كميات كبيرة من إنزيم موجود ضمن برنامج "إنزيم للابتكار"؟ ج: نعم، إذا كنت بحاجة إلى كميات كبيرة من إنزيم للابتكار، يُرجى التواصل مع شركة NEB عبر البريد الإلكتروني EnzymesForInnovation@neb.com. يُرجى ملاحظة أنه قد يكون هناك توافر محدود، وبالتالي قد تطول فترات التسليم للطلبات الكبيرة. قد يكون من الضروري أيضًا إجراء اختبارات إضافية لمراقبة الجودة لتلبية احتياجاتك وتطبيقاتك المحددة. س: ما هي إنزيمات الابتكار؟ ج: مشروع "إنزيمات الابتكار" (EFI) هو مشروع أطلقته شركة NEB لتزويد المجتمع العلمي بإنزيمات فريدة، أملاً في تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص فريدة وتخصصات مميزة غير متوفرة تجارياً في أي مكان آخر، وبجودة عالية تليق بسمعة NEB. تُعتبر الإنزيمات التي انتقلت من تطبيقات غير معروفة أو استكشافية إلى تطبيقات محددة، خريجة مشروع "إنزيمات الابتكار". إذا كانت لديك فكرة عن "إنزيم للابتكار" مع تطبيق مقترح قد يكون مفيداً، يُرجى مراسلتنا عبر البريد الإلكتروني على EnzymesForInnovation@neb.com. لمزيد من المعلومات، يُرجى مشاهدة الفيديو. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.