نيو إنجلاند بيولابس، M0607S، بيروفوسفاتاز NudC

هذا إنزيم للابتكار (EFI). EFI مشروع أطلقته شركة NEB لتوفير إنزيمات فريدة للمجتمع العلمي، أملاً في تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص مثيرة للاهتمام وتخصصات فريدة. الفئات ذات الصلة: تعديل الحمض النووي الريبي (RNA). المواصفات: الوحدة: التعريف: 1 ميكرومول من إنزيم NudC يُحلل 200 ميكرومول أو أكثر من NAD+ إلى NMN+ وAMP في محلول NEBuffer 3.1 بتركيز 1X و5 ملي مول من DTT عند درجة حرارة 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، مضاف إليه 5 ملي مول من DTT، يُحضن عند 37 درجة مئوية. NEBuffer™ r3.1: 100 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 50 ملي مول من Tris-HCl، 10 ملي مول من كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 300 ملي مول من كلوريد الصوديوم، 10 ملي مول من Tris-HCl، 1 ملي مول من DTT، 0.1 ملي مول من EDTA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الأسئلة الشائعة : س: هل يقوم NudC (NEB #M0607) بإزالة غطاء هياكل أخرى؟ أ: وجدت شركة NEB أن إنزيم NudC يزيل غطاء الحمض النووي الريبوزي النموذجي الذي يحتوي على مجموعة App- في الطرف 5′ (مؤدينيل)، وmRNA ذي غطاء G مع الأدينوزين كنيوكليوتيد بادئ، بكفاءة مختلفة مقارنةً بالحمض النووي الريبوزي ذي غطاء NAD+. وقد أُفيد أن NudC يحلل ثنائيات النيوكليوتيدات مثل ADP-ريبوز وADP-جلوكوز، والعوامل المساعدة الأيضية التي تحتوي على جزء ADP، مثل FAD (1) والإنزيم المساعد A وأسيتيل الإنزيم المساعد A (نتائج غير منشورة). لذلك، من المحتمل أن يتمكن NudC من إزالة غطاء الحمض النووي الريبوزي الذي يحمل مجموعة واسعة من النيوكليوتيدات البادئة التقليدية وغير التقليدية، وليس فقط NAD+/NADH. 1. Frick DN and Bessman MJ (1995) J. Biol. Chem. 270,1529-1534. س: هل يزيل NudC غطاء الحمض النووي الريبوزي التقليدي ذي غطاء G؟ ج: وجدت شركة NEB أن إنزيم NudC يزيل غطاء G من الحمض النووي الريبي (RNA) ذي الغطاء G الذي يبدأ بالأدينوزين بكفاءة عالية، بينما تكون فعاليته أقل بكثير مع الحمض النووي الريبي ذي الغطاء G الذي يبدأ بالجوانوزين. س: هل من الممكن استخدام NudC لإنتاج حمض نووي ريبي أحادي الفوسفات 5′ قابل للربط من النيوكليوتيدات غير التقليدية فقط؟ ج: في التطبيقات التي تتطلب التمييز بين هياكل الغطاء غير التقليدية والحمض النووي الريبي ذي الغطاء G في سير عمل يعتمد على الربط 5′، يمكن معالجة عينة الحمض النووي الريبي مسبقًا باستخدام yDcpS (NEB #M0463)، متبوعًا بـ Quick CIP (NEB #M0525) وخطوة تنقية الحمض النووي الريبي لتحويل الحمض النووي الريبي ذي الغطاء G والحمض النووي الريبي المفسفر 5′ الموجود إلى حمض نووي ريبي 5′ هيدروكسيلي، وهو غير متاح للربط. س: هل تتأثر فعالية إزالة الغطاء بواسطة NudC ببنية الحمض النووي الريبي؟ ج: نعم. أُفيد بأن معدل إزالة غطاء الطرف 5′ بواسطة إنزيم NudC أبطأ على الحمض النووي الريبي (RNA) الذي يحتوي على بنية ثانوية في الطرف 5′ (1). إذا كان من المتوقع أن يحتوي الحمض النووي الريبي على بنية ثانوية كبيرة، فيمكن زيادة تركيز الإنزيم و/أو زيادة مدة الحضانة لتحقيق مستوى أعلى من إزالة الغطاء. 1. هوفر ك. وآخرون (2016) نات كيم بيول. 12، 730-734. س: ما هي إنزيمات الابتكار؟ ج: إنزيمات الابتكار (EFI) هو مشروع أطلقته شركة NEB لتوفير إنزيمات فريدة للمجتمع العلمي، على أمل تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص مثيرة للاهتمام وتخصصات فريدة غير متوفرة تجاريًا في أي مكان آخر بالجودة التي تتوقعها من NEB. إنزيمات الابتكار المتخرجة هي إنزيمات انتقلت من كونها ذات تطبيقات غير معروفة أو استكشافية إلى أن أصبحت حجر الزاوية في تطبيق محدد. إذا كانت لديك فكرة عن "إنزيم للابتكار" مع تطبيق مقترح قد يكون مفيدًا، يُرجى مراسلتنا عبر البريد الإلكتروني على EnzymesForInnovation@neb.com. لمزيد من المعلومات، يُرجى مشاهدة الفيديو. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونحن نرى أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدّم هذا التحسين بنفس السعر.