نيو إنجلاند بيولابس، M0646T، إنجين® سباي كاس9 إن إل إس

متوفر الآن: EnGen Spy Cas9 HF1 الفئات ذات الصلة: نوكليازات CRISPR/Cas المواصفات شروط التفاعل 1X NEBuffer™ r3.1 حضانة عند 37 درجة مئوية 1X NEBuffer™ r3.1 100 مليمولار كلوريد الصوديوم 50 مليمولار Tris-HCl 10 مليمولار كلوريد المغنيسيوم 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية) محلول التخزين 300 مليمولار كلوريد الصوديوم 10 مليمولار Tris-HCl 0.1 مليمولار EDTA 1 مليمولار DTT 50% جلسرين الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية التعطيل الحراري 65 درجة مئوية لمدة 5 دقائق الأسئلة الشائعة س: أين تقع إشارة التوطين النووي على EnGen® Spy Cas9 NLS؟ ج: يحتوي EnGen Spy Cas9 NLS على إشارتي توطين نووي تقعان على الطرفين الأميني والكربوكسيلي للبروتين. س: ما هي إشارة التوطين النووي المدمجة مع EnGen® Spy Cas9 NLS؟ ج: يحتوي EnGen Spy Cas9 NLS على إشارة التوطين النووي (NLS) لمستضد T الخاص بفيروس SV40 على الطرفين الأميني والكربوكسيلي للبروتين. س: ما الفرق بين EnGen® Spy Cas9 NLS (NEB #M0646) وCas9 NLS، S. pyogenes (NEB #M0641)؟ ج: يحتوي EnGen Spy Cas9 NLS (NEB #M0646) على إشارتي توطين نووي على الطرفين الأميني والكربوكسيلي للبروتين. في المقابل، يحتوي Cas9 NLS، S. pyogenes (NEB #M0641) على إشارة توطين نووي واحدة على الطرف الكربوكسيلي للبروتين. س: لماذا ألاحظ هضمًا غير مكتمل؟ ج: قد يعود عدم اكتمال الهضم إلى العوامل التالية: نسبة غير صحيحة من نوكلياز Cas9 إلى الحمض النووي الريبوزي الدليل، وموقع الهدف - للهضم الكامل، نوصي بنسبة مولية 10:10:1 أو أعلى من نوكلياز Cas9: الحمض النووي الريبوزي الدليل: موقع الهدف. تسلسل غير مثالي للحمض النووي الريبوزي الدليل - تحقق من تسلسل وتصميم الحمض النووي الريبوزي الدليل. جودة رديئة للحمض النووي الريبوزي الدليل - تحقق من سلامة الحمض النووي الريبوزي الدليل عن طريق الفصل الكهربائي الهلامي. محلول منظم غير مثالي - يرجى استخدام محلول NEBuffer 3.1 المرفق مع الإنزيم. س: هل توفر NEB بلازميدات لاستنساخ الحمض النووي الريبوزي الدليل؟ ج: لا نوزع بلازميدات لاستنساخ الحمض النووي الريبوزي الدليل الفرعي، ولكننا نوصي بزيارة Addgene إذا كنت ترغب في الحصول على بلازميدات الحمض النووي الريبوزي الدليل الفرعي. يمكن استخدام قوالب الحمض النووي قليلة النوكليوتيدات التي تحتوي على محفز T7 وتشفر الحمض النووي الريبوزي الدليل الفرعي مع مجموعة HiScribe T7 Quick High Yield RNA Synthesis Kit (NEB #E2050). نوصي باستخدام مجموعة EnGen® sgRNA Synthesis Kit، S. pyogenes (NEB #E3322S)، التي تستخدم أوليغومرات DNA محددة الهدف مصممة من قبل المستخدم، وتوفر طريقة سريعة لنسخ كميات كبيرة من sgRNA في تفاعل واحد مدته 30 دقيقة. س: كيف أخفف الإنزيم إلى 1 ميكرومولار للتفاعلات المختبرية؟ ج: إذا كنت تخطط لاستخدام تركيز أعلى من الإنزيم لهضم DNA في المختبر، فيمكن تخفيف الإنزيم إلى 1 ميكرومولار في محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X واستخدامه فورًا. يجب عدم تجميد محلول التخفيف 1 ميكرومولار في محلول NEBuffer r3.1 بتركيز 1X. إذا كان سيتم تخزين المحلول المخفف بتركيز 1 ميكرومولار عند درجة حرارة -20 درجة مئوية، فيجب تخفيفه باستخدام المخفف B (مع الألبومين المؤتلف) (NEB #B8533S): 300 ميكرومولار كلوريد الصوديوم، 10 ميكرومولار Tris-HCl، 0.1 ميكرومولار EDTA، 1 ميكرومولار DTT، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مؤتلف، و50% جلسرين (الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية) قبل تحضير التفاعل. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن استبدال الألبومين البقري (BSA) بالألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.