نيو إنجلاند بيولابس، M0663L، إكسونوكلياز T5

يحل هذا المنتج محل إنزيم T5 إكسونوكلياز (NEB #M0363). الفئات ذات الصلة: الإكسونوكليازات والإندونيوكليازات غير المتخصصة. التطبيقات: مواصفات تجميع جيبسون. تعريف الوحدة: تُعرَّف وحدة واحدة من إنزيم T5 إكسونوكلياز بأنها كمية الإنزيم اللازمة لإحداث تغيير قدره 0.00032 A260 نانومتر/دقيقة عند 37 درجة مئوية في محلول rCutSmart. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ 4 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ 4 بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 50 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، 0.1% Triton® X-100، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري: لا يوجد. شروط فحص الوحدة : محلول CutSmart بتركيز 1X؛ 40 ميكروغرام/مل من الحمض النووي لحيوانات منوية سمك السلمون. الأسئلة الشائعة : س: ما الفرق بين إنزيم T5 Exonuclease وإنزيم Lambda Exonuclease (NEB# M0262)؟ ج: على عكس إكسونوكلياز لامدا، يستطيع إكسونوكلياز T5 تحليل الحمض النووي المزدوج الدائري ذي الشقوق. كما يعمل إكسونوكلياز T5 على الحمض النووي أحادي السلسلة، بينما لا يفعله إكسونوكلياز لامدا. س: هل يقوم إكسونوكلياز T5 بتحليل الحمض النووي المزدوج فائق الالتفاف؟ ج: لا. لا تقوم إكسونوكليازات الحمض النووي المزدوج عمومًا بتحليل الحمض النووي فائق الالتفاف أو الحمض النووي الدائري المغلق. تحتاج الإكسونوكليازات إلى نهاية أو شق لبدء نشاطها. س: ما الفرق بين إكسونوكلياز T5 وإكسونوكلياز III (NEB# M0206)؟ ج: يعمل إكسونوكلياز III في الاتجاه من 3' إلى 5'، عكس إكسونوكلياز T5 الذي يعمل في الاتجاه من 5' إلى 3'. س: ما هو نشاط إكسونوكلياز T5 في محاليل NEBuffers؟ ج: NEBuffer 1: أقل من 20%، NEBuffer 2: 75%، NEBuffer 3: 50%، NEBuffer 4: 100%. س: هل يمكن تعطيل إنزيم T5 Exonuclease بالحرارة؟ ج: لا. س: هل يمكن جعل نهايات الحمض النووي غير متداخلة باستخدام إنزيم T5 Exonuclease؟ ج: لا. استخدم بوليميراز الحمض النووي الأول، الجزء الكبير (Klenow) (NEB# M0210) لملء النهايات المتدلية 5' (وتسمى أيضًا النهايات المتراجعة 3') وقم بإزالة النهايات المتدلية 3' أو استخدم نوكلياز فول المونج (NEB# M0250) لإزالة النهايات المتدلية 3' أو 5'. ملاحظة: لا يمكن ملء النهايات المتدلية 3'. س: هل سيعمل إنزيم T5 Exonuclease في محلول rCutSmart؟ ج: نعم، سيعمل إنزيم T5 Exonuclease في محلول rCutSmart. للاطلاع على نسبة نشاطه الوظيفي في rCutSmart، ونسبة نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي الأخرى في عملية الاستنساخ، يُرجى الرجوع إلى مخطط نشاط إنزيمات تعديل الحمض النووي في محلول rCutSmart®. س: ما الفرق بين إنزيم T5 إكسونوكلياز (NEB #M0363) وإنزيم T5 إكسونوكلياز (NEB #M0663)؟ ج: إنزيم T5 إكسونوكلياز (NEB #M0663) هو نسخة مُوسومة بالهيستيدين من إنزيم T5 إكسونوكلياز (NEB #M0363) الذي توقف إنتاجه. تم تعديل تعريف الوحدة ليتوافق مع نسخة المنتج المُصنّعة وفقًا لمعايير التصنيع الجيد (GMP)*. يبقى أداء المنتج وتركيز البروتين وظروف التفاعل كما هي. * "GMP Grade" و"GMP-grade" مصطلحان تجاريان تستخدمهما شركة NEB لوصف المنتجات المصنعة أو المُنجزة في منشأة Rowley التابعة لها. صُممت منشأة Rowley لتصنيع المنتجات في ظل بنية تحتية وضوابط عمليات أكثر صرامة لتحقيق مواصفات منتج أكثر دقة وتلبية متطلبات العملاء. تُصنّع المنتجات في مصنع NEB في رولي وفقًا لمعايير نظام إدارة الجودة ISO 9001 وISO 13485. مع ذلك، لا تقوم NEB حاليًا بتصنيع أو بيع المنتجات المعروفة باسم المكونات الصيدلانية الفعالة (APIs)، كما أنها لا تُصنّع منتجاتها بما يتوافق مع جميع لوائح ممارسات التصنيع الجيدة الحالية.