نيو إنجلاند بيولابس، M0701S، إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية المتخصصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع 1 بيكومول من أوليغونوكليوتيد أحادي السلسلة مكون من 60 قاعدة، يحتوي على موقع ديوكسي زانثوزين واحد*، في حجم تفاعل إجمالي قدره 20 ميكرولتر بعد ساعة واحدة عند درجة حرارة 65 درجة مئوية. *يُحضَّر موقع ديوكسي زانثوزين صناعيًا باستخدام dX في الموضع 24 من أوليغونوكليوتيد أحادي السلسلة مكون من 60 قاعدة، مُوسَم بـ FAM عند الطرف 5'. شروط التفاعل: 1X NEBuffer™ r2.1، حضانة عند 65 درجة مئوية، 1X NEBuffer™ r2.1، 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية)، محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 500 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 0.1 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية ، تعطيل حراري : لا ، الأسئلة الشائعة : س: ما الفرق بين مجموعة إنزيمات USER® (#M5505، #M5508، #M5509) وإنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة (#M0701)؟ ج: منتجات USER (إنزيم USER (#M5505)، وإنزيم USER II غير المستقر حراريًا (#M5508)، وإنزيم USER III المستقر حراريًا (#M5509)) عبارة عن خليط من إنزيمين: UDG وإنزيم نوكلياز داخلي. في المقابل، إنزيم نوكلياز Q المستقر حراريًا (#M0701) هو إنزيم واحد. على الرغم من أن إنزيمات USER وإنزيم نوكلياز Q المستقر حراريًا يتعرفان على ديوكسي يوراسيل في ركائز الحمض النووي ويقطعانه، إلا أن المنتجات الناتجة مختلفة. المنتجات النهائية لإنزيمات USER هي فجوات أحادية النوكليوتيد ذات نهايات وظيفية مختلفة بناءً على نوع USER المستخدم؛ حيث تتم إزالة ديوكسي يوراسيل. أما منتجات إنزيم نوكلياز Q المستقر حراريًا فهي شقوق تحتوي على مجموعة 3′-OH ومجموعة 5′-فوسفات؛ ويبقى ديوكسي يوراسيل موجودًا على الجزء 3′ من الحمض النووي. س: ما الفرق بين إنزيم نوكلياز V (#M0305) وإنزيم نوكلياز Q المستقر حراريًا؟ إنزيم إندونوكلياز Q (#M0701)؟ ج: على الرغم من أن كلاً من إنزيم إندونوكلياز V وإنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة يتعرفان على ديوكسي إينوزين في ركائز الحمض النووي، مما يؤدي إلى تكوين شق مع مجموعة هيدروكسيل 3′ ومجموعة فوسفات 5′، إلا أن موقع الشق يختلف. يقوم إنزيم إندونوكلياز V بقطع الرابطة الفوسفودايسترية الثانية على الجانب 3′ من ديوكسي إينوزين؛ بينما يقوم إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة بقطع الرابطة الفوسفودايسترية الموجودة مباشرةً في الجانب 5′ من ديوكسي إينوزين. بالإضافة إلى ذلك، يكون نشاط إنزيم إندونوكلياز V مثاليًا عند 37 درجة مئوية ويمكن تعطيله بالحرارة؛ بينما يكون نشاط إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة مثاليًا بين 65 درجة مئوية و85 درجة مئوية ولا يمكن تعطيله بالحرارة. س: ما هو نشاط إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة (#M0701) في محاليل NEBuffers المختلفة؟ ج: table, th, td { border: 1px solid black; border-collapse: collapse; } table, td{ border: 1px solid black; border-collapse: collapse; } يتمتع إنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة بنشاط في المحاليل المنظمة التالية (مقارنة بنشاطه في NEBuffer r2.1): NEBuffer r1.1 50% NEBuffer r2.1 100% NEBuffer r3.1 100% rCutSmart Buffer 75% ThermoPol® Reaction Buffer 100% ThermoPol II (خالي من المغنيسيوم) Reaction Buffer 25% LongAmp® Taq Reaction Buffer Pack 75% Isothermal Amplification Buffer 50% OneTaq Standard Reaction Buffer 75% Standard Taq Reaction Buffer 50% Q5® Reaction Buffer 50% Q5U® Reaction Buffer 75% س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم Endonuclease Q المقاوم للحرارة (#M0701)؟ س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة 48,515 دالتون. س: هل إنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة (#M0701) بروتين موسوم؟ ج: يحتوي إنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة على وسم هيستيدين في الطرف الكربوكسيلي. س: هل يمكن ربط ناتج تفاعل إنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة (#M0701)؟ ج: نعم، يمكن ربط ناتج تفاعل إنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة. يُحدث الإنزيم شقًا، مما ينتج عنه مجموعة هيدروكسيل في الطرف 3′ ومجموعة فوسفات في الطرف 5′. س: ما مدى قرب إنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة (#M0701) من الطرف 5′ للحمض النووي؟ ج: يمكن لإنزيم إندو كيو المقاوم للحرارة أن يقطع عند ديوكسي يوراسيل، وديوكسي إينوزين، وديوكسي زانثوزين، حتى من الموضع الثالث للطرف 5′ في كل من الحمض النووي أحادي السلسلة والحمض النووي ثنائي السلسلة. س: ما مدى قرب... هل يقوم إنزيم Thermostable Endonuclease Q (#M0701) بقطع الطرف 3' من الحمض النووي؟ ج: كحد أدنى، يستطيع إنزيم Thermostable Endonuclease Q قطع الحمض النووي عند ديوكسي يوراسيل، وديوكسي إينوزين، وديوكسي زانثوزين، بدءًا من الموضع السادس من الطرف 3' لكل من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) وثنائي السلسلة (dsDNA). س: ما هي درجات الحرارة التي يكون فيها إنزيم Thermostable Endonuclease Q (#M0701) فعالًا؟ ج: يكون إنزيم Thermostable Endonuclease Q فعالًا بين 37 و90 درجة مئوية، لكن فعاليته المثلى تكون بين 65 و85 درجة مئوية. يُظهر إنزيم Thermostable Endonuclease Q فعاليته ضمن نطاق واسع من درجات الحرارة. تم اختبار فعالية إنزيم Thermostable Endonuclease Q (#M0701، 0.2 وحدة) على 1 بيكومول من قليل النوكليوتيدات أحادي السلسلة الموسوم بالفلورسنت والذي يحتوي على يوراسيل واحد لمدة ساعة واحدة في محلول NEBuffer r2.1 بتركيز 1x. درجات حرارة مختلفة. تم الكشف عن نواتج القطع بواسطة الفصل الكهربائي الشعيري. إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة نشط في نطاق واسع من درجات الحرارة (37 درجة مئوية - 90 درجة مئوية)، ولكنه يُظهر نشاطًا مثاليًا بين 65 درجة مئوية و85 درجة مئوية. س: ما هي القواعد المعدلة التي يتعرف عليها إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة (#M0701) ويقطعها؟ ج: يتعرف إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة على وجه التحديد على مواقع الديوكسي يوراسيل، والديوكسي إينوزين، والديوكسي زانثوزين، والمواقع الخالية من القواعد في كل من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) والحمض النووي ثنائي السلسلة (dsDNA) ويقطعها. بالإضافة إلى ذلك، يتعرف إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة على الريبوزيل ويقطعه داخل سلسلة الحمض النووي. س: هل لإنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة (#M0701) نشاط في ثنائيات الحمض النووي الهجينة DNA-RNA؟ ج: يمكن لإنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة قطع الديوكسي يوراسيل داخل سلاسل الحمض النووي عندما تكون السلسلة المكملة إما DNA أو RNA. بالإضافة إلى ذلك، إنزيم إندونوكلياز Q المقاوم للحرارة سيتعرف الإنزيم Q على الريبوزيل ويقطعه داخل سلسلة الحمض النووي DNA عندما تكون السلسلة المكملة إما DNA أو RNA. لا يستطيع الإنزيم Q المقاوم للحرارة القطع عندما يكون الديوكسي يوراسيل أو الريبوزيل موجودًا داخل سلسلة RNA. س: ما هو النشاط النسبي للإنزيم Q المقاوم للحرارة (#M0701) على ركائز مختلفة تحتوي على قواعد نووية معدلة؟ ج: النشاط النسبي للإنزيم Q المقاوم للحرارة على ركائز DNA مختلفة: س: هل يترك أي من إنزيمات USER نهايات قابلة للربط عند القطع عند اليوراسيل؟ ج: لا، لا يترك أي من إنزيم USER (NEB #M5505) أو إنزيم USER II غير المستقر حراريًا (NEB #M5508) أو إنزيم USER III المقاوم للحرارة (NEB #M5509) نهايات قابلة للربط عند القطع عند اليوراسيل. ومع ذلك، سيقوم الإنزيم Q المقاوم للحرارة (NEB #M0701) بعمل شق صغير. يقطع الإنزيم 5' إلى اليوراسيل (مع الحفاظ على القاعدة النيتروجينية سليمة)، ولكنه يترك نهايتي 3' OH و5' P قابلتين للربط بعد القطع. س: ما مدى قرب القطع من نهايات الحمض النووي DNA بواسطة الإنزيم الداخلي المقاوم للحرارة Q (NEB #M0701)؟ ج: يقطع الإنزيم الداخلي المقاوم للحرارة Q ديوكسي يوراسيل على بُعد 6 أزواج قاعدية أو نيوكليوتيدات من النهاية 5' للحمض النووي DNA، سواء كان مزدوج السلسلة أو أحادي السلسلة. كما يقطعه على بُعد 3 أزواج قاعدية أو نيوكليوتيدات من النهاية 3' للحمض النووي DNA، سواء كان مزدوج السلسلة أو أحادي السلسلة. لمزيد من المعلومات، يُرجى مراجعة قسم "قطع ديوكسي يوراسيل بالقرب من نهايات الحمض النووي DNA مزدوج السلسلة وأحادي السلسلة".