نيو إنجلاند بيولابس، M1282S، WarmStart® Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG)

الفئات ذات الصلة: إنزيمات إصلاح الحمض النووي وإنزيمات النوكلياز الداخلية الخاصة بالبنية. تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لإطلاق 60 بيكومول في الدقيقة من قليل النوكليوتيدات أحادي السلسلة من الحمض النووي مكون من 47 قاعدة يوراسيلية واحدة موسومة بالفلورسنت في 30 دقيقة عند 65 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر في محلول Thermopol II Buffer 1X. شروط التفاعل: محلول تفاعل ThermoPol® II (خالي من المغنيسيوم) بتركيز 1X، يُحضن عند 65 درجة مئوية. محلول تفاعل ThermoPol® II (خالي من المغنيسيوم) بتركيز 1X، 20 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار (NH4)2SO4، 10 ملي مولار KCl، 0.1% Triton® X-100 (الأس الهيدروجيني 8.8 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 0.1 مليغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : لا. الوزن الجزيئي النظري: 22717 دالتون. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) في محاليل NEBuffers؟ ج: يُظهر كل من إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) وإنزيم Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) نشاطًا ضئيلًا جدًا في محاليل NEBuffers r1.1 و r2.1 و r3.1 و rCutSmart. س: هل يعمل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) في محلول Thermopol®؟ ج: إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) نشط في محلول Thermopol. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG)؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) في إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 22.7 كيلو دالتون. س: هل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) بروتين مُوسَم؟ ج: لا، إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) ليس بروتينًا مُوسَمًا. س: هل يُثبِّط مُثبِّط Uracil Glycosylase (UGI) إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG)؟ ج: لا، في الظروف القياسية، لا يُثبِّط UGI إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG). س: هل يُحرِّر إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) اليوراسيل من الحمض النووي أحادي السلسلة (ssDNA) وثنائي السلسلة (dsDNA)؟ ج: يعمل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) بكفاءة متساوية في كلٍّ من الحمض النووي أحادي السلسلة وثنائي السلسلة، لذا فإن توصيات الاستخدام هي نفسها لكلا النوعين من الركائز. س: هل يقوم إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) بقطع الحمض النووي الريبوزي (RNA)؟ ج: لا، لا يعمل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) على ركيزة الحمض النووي الريبوزي (RNA). تطورت إنزيمات UDG لإصلاح بقايا dU في الحمض النووي (DNA) التي يمكن أن تتكون عن طريق إزالة الأمين من dC (وبالتالي تجنب طفرة زوج القاعدة C:G إلى T:A التي تحدث عند تضاعف سلسلة اليوراسيل). س: هل يعمل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) في محلول Fpg؟ ج: لا، لا يعمل إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) في محلول Fpg. س: ما معنى WarmStart؟ ج: WarmStart® هو المصطلح الذي نستخدمه لوصف إنزيم محب للحرارة المعتدلة يكون غير نشط في درجة حرارة الغرفة، ويتم تنشيطه عند تسخين التفاعل إلى ما فوق 40 درجة مئوية تقريبًا. تتوفر تقنية WarmStart في المنتجات التالية: بوليميراز الحمض النووي WarmStart Bst 2.0 (NEB #M0538)، والنسخ العكسي WarmStart RTx (NEB #M0380)، ومنتجات Luna أحادية الخطوة RT-qPCR (www.lunaqpcr.com)، وWarmStart Nt.BstNBI (NEB #R0725)، وإنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) (NEB #M1282S). لمزيد من المعلومات حول استخدامنا للأبتاميرات للتحكم في نشاط الإنزيم، يُرجى الرجوع إلى هذه المقالة. س: كيف يُمكن استخدام إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) لمنع انتقال الجين؟ ج: يكون إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) غير نشط في درجات الحرارة المنخفضة، ولا يتداخل مع تضخيم SDA عند درجات حرارة أقل من 42 درجة مئوية. على النقيض من ذلك، فإن إنزيم Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) يكون نشطًا عند درجات حرارة أقل من 42 درجة مئوية، ويمنع تمامًا تضخيم SDA عند هذه الدرجات. بالإضافة إلى ذلك، يكون إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) نشطًا تمامًا عند 65 درجة مئوية، ويمكنه استئصال اليوراسيلات المدمجة من ناتج SDA بمجرد رفع درجة الحرارة إلى 65 درجة مئوية. يتطلب منع التلوث المتبقي بواسطة إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) جزأين: دمج dUTP عند درجات حرارة منخفضة (أقل من 42 درجة مئوية) بواسطة بوليميراز الحمض النووي أثناء تكوين الأمبليكون، واستئصال اليوراسيلات من نواتج التضخيم بعد التضخيم، وتدمير الأمبليكون المحفز بواسطة إنزيم WarmStart Afu Uracil-DNA Glycosylase (UDG) عند درجات حرارة أعلى (حوالي 65 درجة مئوية). س: ما هو تضخيم إزاحة السلسلة (SDA)؟ أ: تضخيم إزاحة السلسلة هو طريقة تضخيم الحمض النووي متساوية الحرارة في المختبر، تعتمد على إنزيم قاطع لقطع أحد سلسلتي الحمض النووي المزدوج، وبوليميراز الحمض النووي ذي نقص في الإكسونوكلياز لتمديد الطرف 3' عند القطع وإزاحة سلسلة الحمض النووي التالية (جي تي ووكر، 1992). يمكن تطبيق هذه الطريقة للكشف السريع عن الحمض النووي المستهدف بحساسية عالية في بيئة الرعاية الصحية الأولية، وقد أصبحت طريقة شائعة للتشخيص الجزيئي. نعرض هنا تفاعل تضخيم إزاحة السلسلة النموذجي باستخدام WarmStart Nt.BstNBI (NEB #R0725) وبوليميراز الحمض النووي Bst 2.0 WarmStart® (NEB #M0538) للكشف عن هدف hBRCA1 في الحمض النووي الجينومي لخلايا HeLa في WarmStart Nt.BstNBI. لمعرفة المزيد والاطلاع على منتجاتنا من تفاعلات تضخيم إزاحة السلسلة وتضخيم إنزيم القطع، يرجى زيارة هذا الرابط.