نيو إنجلاند بيولابس، M1804S، مزيج رئيسي WarmStart® Colorimetric LAMP 2X مع UDG

حل بسيط بخطوة واحدة لتضخيم الحمض النووي DNA أو RNA بتقنية التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) (RT-LAMP). الفئات ذات الصلة: التضخيم المتساوي الحرارة وإزاحة السلسلة، تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR)، وتقنيات التضخيم. التطبيقات: التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة، التضخيم المتساوي الحرارة، تضخيم الحمض النووي DNA، تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وتفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي (qPCR). الأسئلة الشائعة : س: ما الفرق بين استخدام تفاعلات LAMP اللونية وتفاعلات LAMP العادية؟ ج: تعتمد تقنية LAMP اللونية الخاصة بنا، والمُعتمدة على الرقم الهيدروجيني، على نفس مبدأ تضخيم LAMP وRT-LAMP، ولكنها مصممة للسماح بالكشف البصري عن التفاعلات الإيجابية. تحتوي خلطات WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mixes على صبغة الفينول الأحمر الحساسة للرقم الهيدروجيني في محلول تفاعل منخفض التركيز، يتغير لونه من الوردي الفاتح إلى الأصفر عند تضخيم الحمض النووي DNA (نتيجةً لإطلاق بروتون لكل نيوكليوتيد مُدمج). يُتيح هذا الكشف استخدام معدات بسيطة (مثل الماء الساخن للحضانة، والكشف البصري) بدلاً من الأجهزة المعقدة والمكلفة لتفاعلات LAMP. س: ما هي مدة حضانة تفاعل LAMP اللوني قبل التحقق من النتائج؟ ج: نوصي بحضانة تفاعل LAMP اللوني لمدة 30 دقيقة. عند هذه المدة، ستتغير ألوان معظم تفاعلات LAMP الإيجابية، وستكون عينات التحكم السلبية (بدون قالب) سلبية. يمكن تقصير المدة إلى 15-20 دقيقة مع المقايسات الجيدة أو الأهداف ذات النسخ العالية، أو إطالتها إلى 60 دقيقة مع المدخلات المنخفضة جدًا، أو العينات غير النقية، أو المقايسات الأبطأ. عند تحسين وقت التفاعل، يمكن التحقق من التقدم ببساطة من خلال النظر إلى ألوان التفاعل، وإطالة مدة الحضانة إذا لم يكتمل. تجدر الإشارة إلى أنه عند إطالة وقت التفاعل، يجب أيضًا مراقبة عينات التحكم السلبية (NTC) للتأكد من عدم وجود نتائج إيجابية خاطئة. س: ما هو المحلول المنظم الذي يجب استخدامه لعينات الهدف والبادئات المستخدمة في تفاعل LAMP اللوني؟ ج: نوصي بإذابة أو تخفيف الحمض النووي المستهدف (DNA أو RNA) في الماء وإضافة 1-5 ميكرولتر إلى 25 ميكرولتر من تفاعلات LAMP. يمكن استخدام محلول TE (10 ملي مولار Tris، 1.0 ملي مولار EDTA، درجة حموضة 7.5-8.0)، ولكن يجب ألا تزيد كمية الحمض النووي المستهدف المذاب في محلول TE عن 1-2 ميكرولتر (أو أقل من 10% من الحجم النهائي). وبالمثل، يجب ألا تتجاوز أي عينة مخزنة في محلول قلوي (درجة حموضة أعلى من 8.5) أو حمضي (درجة حموضة أقل من 7) 10% من حجم التفاعل النهائي، لأن الكمية الأكبر قد تؤثر على الكشف القائم على درجة الحموضة. إذا كانت هناك حاجة إلى أكثر من 5 ميكرولتر للحصول على عدد نسخ كافٍ، فاستخدم الماء أو محلولًا مخففًا بنسبة 0.1X من محلول العينة. س: ما هو تركيز أيونات المغنيسيوم (Mg++) في مزيج LAMP اللوني الرئيسي 2X؟ ج: يحتوي المزيج المضاعف (2X) على 16.0 ملي مول من كبريتات المغنيسيوم، وبالتالي يحتوي على 8.0 ملي مول من كبريتات المغنيسيوم في التفاعل النهائي (1X). س: هل يمكن استخدام المزيج الرئيسي لتقنية LAMP اللونية المضاعفة (2X) في الأجهزة التي تستخدم الكشف الفلوري لتضخيم الحمض النووي أو قياس العكارة في الوقت الحقيقي؟ ج: يتوافق المزيج الرئيسي مع طرق الكشف الفلوري عند إضافة أصباغ فلورية تتداخل مع الحمض النووي، ويعطي سرعة تفاعل مماثلة لتقنية LAMP التقليدية. من الممكن أيضًا إجراء كشف LAMP على مقياس العكارة في الوقت الحقيقي، على الرغم من أن سرعة التفاعل أبطأ قليلاً من سرعة تفاعل تقنية LAMP التقليدية. س: ما مدى استقرار مزيج WarmStart الرئيسي لتقنية LAMP اللونية المضاعفة (2X)؟ ج: تتميز مزيجات LAMP اللونية بالاستقرار في ظل ظروف المناولة والاستخدام القياسية. تحتوي على تركيز منخفض من محلول Tris ذي الرقم الهيدروجيني 8، ويظهر الفينول الأحمر الحساس للرقم الهيدروجيني لونًا ورديًا ساطعًا بالقرب من هذا الرقم الهيدروجيني. بعد استخدام الأنبوب نفسه عدة مرات، قد ينخفض ​​الرقم الهيدروجيني انخفاضًا طفيفًا، لكنه عادةً لا يؤثر على أداء التفاعل طالما بقي لون المزيج ورديًا قبل التضخيم. أحيانًا، بعد استخدامات متعددة وتعرض مطول للهواء، قد ينخفض ​​الرقم الهيدروجيني إلى أقل من 7، ويتحول لون المزيج إلى برتقالي فاتح أو أصفر قبل الاستخدام. يُشير هذا التغير اللوني إلى أن المحلول لم يعد مناسبًا لتفاعل LAMP اللوني. لذا، يُنصح بتجنب التعرض المطول للهواء عن طريق إغلاق أغطية الأنابيب بإحكام وتخزين المزيج الرئيسي في القارورة الأصلية (أو في قوارير مماثلة مزودة بحلقات مانعة للتسرب) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. إذا تم سحب المزيج الرئيسي باستخدام ماصة ووضعه في أنابيب شرائح أو أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو ما شابه، فننصح باستخدامه في نفس اليوم. س: كيف أصمم بادئات LAMP؟ ج: قد يكون تصميم بادئات LAMP يدويًا أمرًا صعبًا، لذا يُنصح بشدة باستخدام برامج متخصصة لسهولة التصميم وزيادة احتمالية نجاح التفاعل. نوصي باستخدام أداة تصميم بادئات LAMP من NEB. نظرًا لأن أداء ومستويات تضخيم الحمض النووي غير المعتمد على القالب قد تختلف حتى مع التصميم الحاسوبي، نوصي بتقييم 2-4 مجموعات كاملة من بادئات LAMP للحصول على أفضل حساسية ونوعية قبل اختيار المجموعة النهائية. للحصول على نظرة عامة حول كيفية تصميم بادئات LAMP واستخدامها، يُرجى مشاهدة البرنامج التعليمي لأداة تصميم بادئات LAMP، وقراءة هذه الملاحظة التطبيقية لمزيد من التفاصيل. س: يحتوي مزيج WarmStart LAMP Master Mix على بعض الرواسب في الأنبوب بعد إذابته، هل هذا طبيعي؟ ج: نعم، يُعد ترسب مزيج LAMP Master Mix بعد التجميد/الإذابة أمرًا طبيعيًا. من المهم إعادة تعليق المزيج عن طريق الخلط جيدًا أو استخدام جهاز الخلط الدوامي لإذابة جميع الرواسب، ولكن بعد التعليق، يمكن استخدام مزيج Master Mix كالمعتاد. س: ما الفرق بين مزيج WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix مع UDG (NEB #M1804) ومزيج WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA) (NEB #M1800)؟ ج: يحتوي كلا مزيجَي WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix على صبغة حساسة للأس الهيدروجيني في محلول تفاعل منخفض التركيز، يتغير لونها من الوردي الفاتح إلى الأصفر عند تضخيم الحمض النووي. يتيح هذا الكشف البصري البسيط، بالإضافة إلى حضانة بدرجة حرارة واحدة، استخدام معدات أقل تعقيدًا (مثل أجهزة التسخين والحاضنات) مقارنةً بتفاعلات LAMP التقليدية. يُعدّ مزيج WarmStart® Colorimetric LAMP 2X Master Mix مع UDG نسخةً مُعدّلة من M1800، حيث يحتوي على dUTP و UDG المقاوم للحرارة في القطب الجنوبي (NEB #M0372)، مما يمنع تضخيم نواتج التفاعلات السابقة التي تحتوي على اليوراسيل. تُقلّل هذه الإضافات من احتمالية التلوث المتبقي (حيث يمكن أن يُستخدم ناتج تفاعل سابق بشكل غير متوقع كركيزة لتفاعل لاحق). يحتوي كلا المزيجين على WarmStart Bst 2.0® و WarmStart RTx، ويمكن استخدامهما لتضخيم كل من الحمض النووي الريبي (RNA) والحمض النووي (DNA)/الحمض النووي المكمل (cDNA). س: ماذا لو كان لون مزيج تفاعل LAMP اللوني برتقاليًا بدلًا من الوردي قبل التضخيم؟ ج: تتميز مزائج تفاعل LAMP اللونية بثباتها في ظل ظروف الاستخدام والتداول القياسية. تحتوي هذه المزائج على تركيز منخفض من محلول Tris ذي الرقم الهيدروجيني 8، ويُظهر الفينول الأحمر الحساس للرقم الهيدروجيني لونًا ورديًا زاهيًا عند هذا الرقم الهيدروجيني. بعد الاستخدام المتكرر لنفس الأنبوب، قد يحدث انخفاض طفيف في الرقم الهيدروجيني، ولكنه عادةً لا يؤثر على أداء التفاعل طالما بقي لون المزيج ورديًا قبل التضخيم. في بعض الأحيان، وبعد استخدامات متعددة وتعرض مطول للهواء، قد ينخفض ​​الرقم الهيدروجيني إلى أقل من 7، ويتحول لون المزيج إلى برتقالي فاتح أو أصفر قبل الاستخدام. يُشير هذا التغير اللوني إلى أن المحلول لم يعد مناسبًا لتفاعل LAMP اللوني. لذا، يُنصح بتجنب التعرض المطول للهواء عن طريق إغلاق أغطية الأنابيب وتخزين المزيج الرئيسي في القارورة الأصلية (أو في قوارير مماثلة مزودة بحلقات مانعة للتسرب) عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. إذا تم سحب المزيج الرئيسي باستخدام الماصة ووضعه في أنابيب شرائح أو أنابيب تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أو ما شابه، فنوصي باستخدامه في نفس اليوم. س: هل يُمكّن مزيج WarmStart® Colorimetric LAMP Master Mix مع UDG من منع التلوث/تقليل التلوث المتبقي؟ ج: نعم، يتكون مزيج WarmStart® Colorimetric LAMP Master Mix مع UDG من مزيج من dTTP وdUTP. وهذا يضمن تضخيمًا متساوي الحرارة فعالًا، بالإضافة إلى دمج dU في نواتج التفاعل. يحتوي المزيج أيضًا على UDG غير مستقر حراريًا في القطب الجنوبي (NEB #M0372). تعمل نواتج LAMP التي تحتوي على dU كركيزة لإنزيم يوراسيل دي إن إيه جليكوزيلاز، مما يسمح بمنع التلوث المتبقي. يجب تحضير التفاعلات في درجة حرارة الغرفة (عادةً 22-25 درجة مئوية) قبل الحضانة المتساوية الحرارة عند 65 درجة مئوية للسماح بتحلل نواتج التضخيم المحتوية على dU، أو إذا رغبت في ذلك، حضانة لمدة 10 دقائق عند 25 درجة مئوية قبل إضافة تفاعل LAMP إلى سير العمل. نظرًا لأن تفاعل LAMP يمكن أن يُنتج كميات كبيرة من الحمض النووي في فترات زمنية قصيرة جدًا، فإن أفضل الممارسات لتقليل التلوث تتضمن عدم فتح تفاعلات LAMP بعد التضخيم. س: ما مقدار العينة التي يمكن إضافتها إلى تفاعل LAMP اللوني كمدخل؟ ج: للحصول على أفضل النتائج، نوصي باستخدام 2 ميكرولتر من الحمض النووي المستخلص في تفاعل حجمه 25 ميكرولتر. يمكن تحمل أحجام أكبر أو أصغر من العينات. تأكد من استخلاص الحمض النووي أو تحضيره في الماء لتجنب نقل كمية زائدة من المحلول المنظم إلى التفاعل. يجب ألا تتجاوز كمية المادة المستخلصة في محلول TE أو محلول استخلاص مشابه 5 ميكرولتر (20% حجم/حجم) من حجم التفاعل النهائي. يجب ألا يتجاوز حجم العينات في وسط النقل (VTM أو UTM) 2 ميكرولتر (8% حجم/حجم). لزيادة حجم العينة، استخدم محلول الإذابة بتركيز 0.1X أو الماء لتحضير الحمض النووي. س: هل يمكنني مراقبة تغير لون تفاعلات LAMP اللونية باستخدام مطياف ضوئي؟ ج: نعم. يمكن مراقبة التفاعل في الوقت الفعلي أو عند نقطة النهاية كجزء من سير عمل عالي الإنتاجية عن طريق قياس نسبة الامتصاص عند 432 نانومتر/560 نانومتر. س: ما هي مكونات مزيج WarmStart® Colorimetric LAMP Master Mix مع UDG، وما الذي أحتاجه أيضًا لإجراء تفاعل LAMP؟ ج: يحتوي مزيج WarmStart Colorimetric LAMP Master Mix مع UDG على محلول تفاعل منخفض Tris مع جميع العوامل المساعدة اللازمة بتركيزات مُحسَّنة 2X لتحليلات LAMP: بوليميراز الحمض النووي Bst 2.0 WarmStart®، وWarmStart RTx، وإنزيم غليكوزيلاز الحمض النووي اليوراسيل الحراري غير المستقر في القطب الجنوبي (UDG)، وdTTP/dUTP، والفينول الأحمر للكشف عن درجة الحموضة في تفاعل LAMP. لإجراء تفاعل LAMP أو RT-LAMP، يُضيف المستخدم البادئات، والحمض النووي المستهدف (DNA أو RNA)، ويضبط التركيز النهائي إلى 1X. يمكن الاطلاع على التعليمات التفصيلية في البروتوكول. س: هل يمكن استخدام مزيج WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix في الأجهزة التي تستخدم الكشف الفلوري؟ ج: يتوافق المزيج الرئيسي اللوني مع طرق الكشف الفلوري عند إضافة أصباغ فلورية تتداخل مع الحمض النووي (SYTO 9 أو ما شابه)، ويُعطي سرعات تفاعل مماثلة لتفاعل LAMP التقليدي. مع ذلك، نوصي باستخدام منتجات LAMP القياسية لدينا (NEB #E1700، E1708) عندما تكون القراءة الأساسية هي التألق. س: ما هي درجة الحرارة المثلى لتضخيم LAMP/RT-LAMP؟ ج: نوصي بـ 65 درجة مئوية كدرجة حرارة ابتدائية لـ LAMP. مع ذلك، من الممكن إجراء تفاعلات LAMP وRT-LAMP عند درجات حرارة تتراوح بين 55 و70 درجة مئوية، وذلك حسب نوع مجموعة البادئات والأهداف. س: ما هي سرعة ظهور النتيجة المتوقعة؟ ج: يختلف تضخيم الهدف تبعًا لعدد من العوامل، بما في ذلك تصميم البادئات (نوصي باستخدام أداة تصميم بادئات LAMP من NEB)، ونقاء القالب وكميته. نقترح البدء بفترة حضانة مدتها 30 دقيقة. إذا رغبت، يمكن تقصير الوقت إلى 15-20 دقيقة مع المقايسات المُحسَّنة أو الأهداف ذات النسخ العالية. بدلاً من ذلك، يمكن إطالته إلى 60 دقيقة للعينات ذات المدخلات المنخفضة، أو العينات غير النقية، أو المقايسات الأبطأ. لاحظ أنه عند تمديد وقت التفاعل، يجب أيضًا مراقبة عينات التحكم السلبية (NTCs) للتأكد من عدم وجود نتائج إيجابية خاطئة. س: هل يمكنني تحضير تفاعلات LAMP/RT-LAMP في درجة حرارة الغرفة؟ ج: نعم، إن إنزيمات بوليميراز الحمض النووي Bst وإنزيم النسخ العكسي المستخدمة في هذا المزيج الرئيسي هي تركيبات WarmStart®، لذا يتم تثبيطها بواسطة الأبتاميرات المعدلة في درجة حرارة الغرفة. وبناءً على ذلك، يمكن تحضير التفاعلات في درجة حرارة الغرفة دون التأثير بشكل كبير على نشاط LAMP. لمزيد من المعلومات حول تعديل نشاط الإنزيم في درجة حرارة الغرفة باستخدام الأبتاميرات، يرجى الاطلاع على "استخدام الأبتاميرات للتحكم في أنشطة الإنزيم: Hot Start Taq وما بعده". س: حدث تضخيم في عينة (عينات) التحكم السلبية (NTC) بعد الحضانة متساوية الحرارة. ما السبب؟ ج: قد يشير التضخيم في عينة التحكم السلبية (بدون قالب) خلال 30 دقيقة إلى تلوث متبادل أثناء تحضير التفاعل أو مشكلة عامة. بعض مجموعات البادئات أكثر عرضة للتضخيم غير المحدد من غيرها. نوصي بتقييم مجموعتين على الأقل من بادئات LAMP لأي هدف محدد. بالإضافة إلى ذلك، قد تكون بعض صيغ التفاعل أو إجراءات العمل أكثر عرضةً للتضخيم غير النوعي مع مجموعات بادئات معينة، مثل: أحجام التفاعل الكبيرة في أوعية صغيرة (مثل 20 ميكرولتر في صفائح 384 بئرًا)، ودرجات حرارة التفاعل المنخفضة (مثل 60 درجة مئوية بدلًا من 65 درجة مئوية). عند استخدام جهاز التدوير الحراري في الوقت الحقيقي، يمكن تضمين منحنى الذوبان أو التمسخ بعد حضانة LAMP للتمييز بين التضخيم الزائف والتلوث المتبادل، حيث أن كل ناتج تضخيم LAMP سينتج عنه منحنى ذوبان فريد. إذا كانت نتيجة تفاعل NTC إيجابية عند إعادة الاختبار و/أو تغيير إجراءات العمل، فاستبدل جميع مخزونات الكواشف ونظف مساحة العمل بمطهر سطحي مناسب، مثل مبيض بنسبة 10% (تخفيف 1:10 من هيبوكلوريت الصوديوم التجاري بتركيز 5.25-6.0%). س: هل هناك حاجة إلى خطوة حضانة منفصلة لـ RT-LAMP؟ ج: لا داعي لخطوة النسخ العكسي المنفصلة لإجراء تفاعل RT-LAMP، حيث أن إنزيم النسخ العكسي WarmStart RTx يُنتج الحمض النووي التكميلي (cDNA) أثناء الحضانة متساوية الحرارة عند 65 درجة مئوية. س: هل يجب استخدام غوانيدين هيدروكلوريد (B2619A) في تفاعلات LAMP اللونية؟ ج: نوصي بأن تحتوي تفاعلات LAMP اللونية على تركيز نهائي قدره 40 ملي مولار من غوانيدين هيدروكلوريد، وبالتالي توفيره لإضافته إلى تفاعل LAMP في سير العمل القياسي لفيروس SARS-CoV-2. مع ذلك، قد تُدخل بعض إجراءات تحضير العينات الأولية مصدرًا للغوانيدين في العينة، والذي يمكن أن ينتقل إلى تفاعل LAMP. إذا كان الغوانيدين سينتقل إلى التفاعل مع المادة المدخلة، فنوصي بعدم تجاوز 60 ملي مولار في التفاعل النهائي، واستبدال الحجم المخصص لغوانيدين هيدروكلوريد بماء خالٍ من النيوكلياز. يُعزز الغوانيدين التضخيم متساوي الحرارة، مما يُؤدي إلى كشف أسرع لحمض SARS-CoV-2 النووي الريبي (RNA). أُجري تفاعل التضخيم المتساوي الحرارة اللوني (LAMP) باستخدام عينات موجبة مُنقّاة (10 نانوغرام/ميكرولتر من الحمض النووي الريبي البشري الكلي + 10000 نسخة من الحمض النووي الريبي الاصطناعي لفيروس SARS-CoV-2 لكل تفاعل). استُخدمت مجموعات البادئات E1 أو N2 من مجموعة اختبار SARS-CoV-2 السريع للتضخيم المتساوي الحرارة اللوني (LAMP) كما هو موضح، ورُصد التضخيم في الوقت الحقيقي باستخدام صبغة فلورية. بالنسبة لكلا مجموعتي البادئات، أدى إضافة هيدروكلوريد الغوانيدين إلى تركيز نهائي يتراوح بين 40 و60 ملي مولار إلى تعزيز التضخيم، مما أدى إلى الكشف المبكر وتغير اللون بشكل ملحوظ. س: هل لدى NEB مزيج رئيسي لتفاعلات LAMP أو RT-LAMP؟ ج: نعم. نوفر عدة خيارات لدعم بروتوكولات LAMP/RT-LAMP. تتضمن مجموعة WarmStart® LAMP (DNA وRNA) (NEB #E1700) صبغة فلورية LAMP بتركيز 50X لدعم الكشف الفلوري عن تفاعلات LAMP/RT-LAMP. يحتوي مزيج WarmStart Colorimetric LAMP 2X Master Mix (DNA & RNA) (NEB #M1800) على مؤشر لوني يعتمد على الرقم الهيدروجيني للكشف البصري عن تفاعلات LAMP/RT-LAMP (يشير تغير اللون من الوردي إلى الأصفر إلى التضخيم). تتضمن الإصدارات المُحدثة من كلا المنتجين إنزيم UDG وdUTP غير المستقرين حراريًا لتقليل خطر التلوث المتبقي (NEB #E1708 وNEB #M1804 على التوالي). بالإضافة إلى ذلك، يتوافق مزيج WarmStart Multi-Purpose LAMP/RT-LAMP 2X Master Mix (مع UDG) (NEB #M1708) مع أنواع مختلفة من عينات الإدخال ويدعم طرق كشف متعددة، بما في ذلك هيدروكسي نافثول الأزرق. تحتوي جميع مزيجات LAMP الرئيسية على مزيج من إنزيم النسخ العكسي WarmStart RTx وإنزيم بوليميراز الحمض النووي WarmStart Bst 2.0 لتضخيم سريع وفعال من كل من أهداف الحمض النووي DNA والحمض النووي الريبي RNA. لا يتطلب كل مزيج سوى بادئات LAMP التي يوفرها المستخدم وعينات الحمض النووي المستهدف (DNA أو RNA). س: ما هي تقنية LAMP وRT-LAMP؟ ج: التضخيم المتساوي الحرارة بوساطة الحلقة (LAMP) هي طريقة تضخيم متساوية الحرارة مصممة للكشف عن الحمض النووي المستهدف دون الحاجة إلى معدات معقدة. تستخدم هذه التقنية بوليميراز DNA مُزيح للسلسلة، مثل بوليميراز Bst DNA، و4-6 بادئات تتعرف على 6-8 مناطق مميزة من الحمض النووي المستهدف لإجراء تفاعل تضخيم عالي التخصص. توفر تقنية LAMP حساسية عالية (تصل إلى فيمتوغرام أو أقل من 10 نسخ من الهدف) مع نتائج سريعة: يمكن إجراء التفاعلات في غضون 5-10 دقائق فقط. يمكن إجراء التفاعلات بموارد محدودة، باستخدام حمام مائي للحضانة والكشف عن النتائج بالعين المجردة، أو باستخدام القياس في الوقت الحقيقي وأجهزة عالية الإنتاجية. يتم الكشف عن أهداف RNA بإضافة بسيطة لإنزيم النسخ العكسي إلى تفاعل LAMP، بينما يتم إجراء RT-LAMP كعملية متساوية الحرارة من خطوة واحدة. إنزيم النسخ العكسي WarmStart RTx (NEB #M0380) هو بوليميراز DNA موجه بالحمض النووي الريبي (RNA) مرتبط بأبتامر قابل للانعكاس، مما يثبط نشاط RTx عند درجة حرارة أقل من 40 درجة مئوية، وهو ما يجعله مناسبًا بشكل خاص لتقنية RT-LAMP. لمعرفة المزيد والاطلاع على منتجاتنا الخاصة بتقنية LAMP، يرجى زيارة صفحة نظرة عامة على تطبيقات LAMP. س: ما نوع التنقية الموصى به لبادئات LAMP؟ ج: عند فحص مجموعات متعددة من بادئات LAMP لتحديد تلك ذات الأداء الأمثل لهدف معين، فإن إزالة الأملاح القياسية كافية بشكل عام. ومع ذلك، نوصي بتنقية بادئات FIP وBIP باستخدام PAGE أو HPLC كحد أدنى للاختبار النهائي لضمان دقة النتائج من حيث وقت الكشف والحساسية.