نظام تغطية فيروس الوقس M2080S من شركة نيو إنجلاند بيولابس

يتوفر أيضًا كاشف من الدرجة GMP. الفئات ذات الصلة: مواصفات تغطية الحمض النووي الريبي (RNA) تعريف الوحدة: تُعرَّف وحدة واحدة من إنزيم تغطية فيروس الوقس بأنها كمية الإنزيم اللازمة لدمج 10 بيكومول من (α 32 P) GTP في نسخة 80 نيوكليوتيد في ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول التغطية 1X، يُضاف إليه 0.5 ملي مولار من GTP و0.1 ملي مولار من S-أدينوسيل ميثيونين (SAM)، ويُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول التغطية 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 5 ملي مولار KCl، 1 ملي مولار MgCl2، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 20 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، 0.1% (وزن/حجم) Triton® X-100، الأس الهيدروجيني 8 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما هو Cap-0 وCap-1؟ ج: Cap-0 هو N7-ميثيل غوانوزين مرتبط بالنيوكليوتيد 5′ من خلال رابطة ثلاثية الفوسفات 5′ إلى 5′، ويُشار إليه عادةً باسم m7G cap أو m7Gppp- في المراجع العلمية. في الخلية، يُعدّ تركيب Cap-0 ضروريًا لترجمة mRNA الحامل للغطاء بكفاءة. وتُنتج عملية مثيلة إضافية على الموقع 2′O للنيوكليوتيد البادئ تركيب Cap-1، أو ما يُشار إليه بـ m7GpppNm-، حيث يرمز Nm إلى أي نيوكليوتيد مُثيل على الموقع 2′O. وقد ثبتت أهمية Cap-1 في التهرب من الاستجابة المناعية الفطرية الخلوية في الجسم الحي. س: هل يمكن استخدام نظائر الغطاء في تفاعل التغطية لإنزيم تغطية فيروس الوقس (NEB #M2080)؟ ج: لا. يستخدم إنزيم تغطية فيروس الوقس GTP وSAM لتكوين تركيب غطاء على 5′ ثلاثي الفوسفات RNA، وهو عادةً نسخة اصطناعية مُولّدة عن طريق النسخ في المختبر. من ناحية أخرى، يتم استخدام نظائر الغطاء، مثل GpppG (NEB #S1407)، وm7GpppG (NEB #S1404)، وm7GpppA (NEB #S1405S) ونظير الغطاء العكسي المضاد (ARCA؛ NEB #S1411) أثناء النسخ في المختبر، حيث يتم دمج نظير الغطاء مباشرة في النسخة كأول نيوكليوتيد في النهاية 5′.