مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، M7636S، إنزيم DNA Gyrase (بكتيريا الإشريكية القولونية)

الفئات ذات الصلة : أخرى، إنزيمات تعديل الحمض النووي وتقنيات الاستنساخ. المواصفات: المواد المطلوبة (غير متوفرة): ماء خالٍ من النيوكلياز (NEB #B1500). تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لتحويل 0.5 ميكروغرام من بلازميد pUC19 المُرخى إلى الشكل الحلزوني الفائق في محلول تفاعل الجيراز 1X، مع حضانة لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 30 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول تفاعل الجيراز 1X، حضانة عند 37 درجة مئوية، تعطيل حراري عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. الأسئلة الشائعة : س: هل يستطيع إنزيم DNA Gyrase (E. coli) (NEB #M7636) تكوين حلزونات فائقة في كل من الحمض النووي الدائري المغلق والمفتوح؟ ج: يستطيع إنزيم DNA Gyrase (E. coli) تكوين حلزونات فائقة في الحمض النووي الدائري المغلق، ولكنه لا يستطيع ذلك في الحمض النووي الدائري المفتوح. س: هل يعمل إنزيم DNA Gyrase (E. coli) (NEB #M7636) على الحمض النووي الخطي؟ ج: لا. يعمل إنزيم DNA Gyrase (E. coli) تحديدًا على الحمض النووي الدائري المغلق، ولا يُدخل التواءات فائقة في الحمض النووي الخطي. س: هل يتوافق إنزيم DNA Gyrase (E. coli) (NEB #M7636) مع عمليات التحويل أو النقل الجيني؟ ج: نعم. يُعد الحمض النووي ذو الالتفاف الفائق الناتج عن إنزيم Gyrase مناسبًا للتحويل، وقد يُحسّن كفاءة النقل الجيني في بعض الأنظمة. س: هل توجد ملوثات تُثبّط نشاط إنزيم DNA Gyrase (E. coli) (NEB #M7636)؟ ج: نعم. تجنّب استخدام EDTA أو SDS أو الفينول أو أي ملوثات أخرى في تحضيرات الحمض النووي، لأنها قد تُثبّط عمل الإنزيم. س: كيف يُجرى فصل الحمض النووي المُعالج بإنزيم DNA Gyrase (E. coli) (NEB #M7636) على هلام؟ ج: للتحقق من نتيجة تفاعل توبويزوميراز أو جيريز، يجب إجراء التفاعل على هلام باستخدام محلول تشغيل الهلام الخالي من بروميد الإيثيديوم. يمكن تلوين الهلام ببروميد الإيثيديوم لاحقًا. س: هل عدد الالتواءات (ΔLk) أو كثافة الالتفاف الفائق (σ) الناتج عن تفاعل جيريز الحمض النووي (الإشريكية القولونية) (NEB #M7636) ثابت أم عشوائي؟ ج: عدد الالتواءات الناتج ليس عشوائيًا ولا ثابتًا. يوجد توزيع للجزيئات بأعداد مختلفة من الالتفافات، بناءً على عدد متوسط. يمكن أن تختلف هذه القيمة بناءً على عوامل، مثل الرقم الهيدروجيني، ودرجة الحرارة، والقوة الأيونية، والتسلسل، والطول، وتكوين الشكل الصليبي، إلخ. س: هل سيضيف جيريز الحمض النووي (الإشريكية القولونية) (NEB #M7636) التفافات فائقة سالبة إضافية في الحمض النووي الملتف جزئيًا بالفعل؟ ج: يمكن لإنزيم DNA Gyrase (من بكتيريا الإشريكية القولونية) إضافة التواءات فائقة سالبة إلى الحمض النووي الدائري، حتى لو كان ملتفًا جزئيًا بالفعل، إلى أن يتعذر إضافة المزيد من الالتواءات الفائقة. س: هل يعمل إنزيم DNA Gyrase من الإشريكية القولونية في محاليل NEBuffers الأخرى؟ ج: لا يعمل إنزيم DNA Gyrase من الإشريكية القولونية بكفاءة في محاليل NEBuffers الأخرى. فهو لا يُظهر أي نشاط في محلول تفاعل T4 DNA Ligase. عند إضافة تركيز نهائي من ATP قدره 1.75 ملي مولار إلى محاليل NEBuffers، يكون النشاط المُلاحظ كما يلي: NEBuffer™ r1.1: 0%، NEBuffer™ r2.1: 0%، NEBuffer™ r3.1: 0%، rCutSmart™ Buffer: 12.5%