مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، N0362S، سلم الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة

الفئات ذات الصلة: علامات وسلالم الحمض النووي الريبي، مواصفات علامات وسلالم الحمض النووي الريبي: القواعد ، الجزء، أزواج القواعد: 1 9000، 2 7000، 3 5000، 4 3000، 5 2000، 6 1000، 7 500. نطاق الحجم الفعال: من 500 إلى 9000 زوج قاعدي. محلول التخزين : 20 ملي مولار سترات الصوديوم، 1 ملي مولار EDTA، درجة الحموضة 6 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما أنواع الجل الموصى بها لسلالم الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة وثنائي السلسلة؟ (N0363، N0362، N0364) ج: بشكل عام، عند العمل مع جزيئات الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة، يجب استخدام جل مُفَكِّك، ومحلول تحميل/صبغة عينة مُفَكِّكة تحتوي إما على الفورماميد أو اليوريا، وصبغة SYBR Gold للتلوين. يرتبط صبغ SYBR Gold بشكل تفضيلي بالجزيئات أحادية السلسلة، مما يوفر رؤية جيدة للحزم بعد الفصل الكهربائي الهلامي. في بعض الحالات، عندما تكون جزيئات ssRNA كبيرة الحجم، مثل سلم ssRNA (N0362S)، يمكن استخدام هلام طبيعي وتلوينه ببروميد الإيثيديوم. ولكن يجب مراعاة ضرورة تحضير عينات ssRNA دائمًا باستخدام محلول تحميل/صبغة مُفسِّخة للبروتين تحتوي على الفورماميد أو اليوريا. عند التعامل مع جزيئات RNA ثنائية السلسلة، يكفي استخدام هلام طبيعي، ومحلول تحميل/صبغة غير مُفسِّخة للبروتين، وتلوين الهلام ببروميد الإيثيديوم أو SYBR Green أو SYBR Safe. س: ما أنواع الهلام وأصباغ التلوين التي يمكنني استخدامها مع سلم ssRNA (N0362S) من NEB؟ ج: على الرغم من أن سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (N0362S) يتكون من جزيئات أحادية السلسلة، يمكنك تشغيل السلم المُجهز على هلام طبيعي مثل هلام الأغاروز-TBE بتركيز 1.0% - 1.2% وتلوين الهلام باستخدام SYBR Gold أو بروميد الإيثيديوم. س: ما مقدار سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة الذي أحتاجه لتحميله على هلام FlashGel 1.2% (Lonza)؟ ج: نوصي بتحميل 0.5 ميكرولتر - 1 ميكرولتر من سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة. على سبيل المثال، امزج 1 ميكرولتر من سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة مع 9 ميكرولتر من صبغة تحميل الحمض النووي الريبوزي المرفقة (2X)، وحضّن المزيج عند 90 درجة مئوية لمدة دقيقتين، ثم برّده على الجليد، وحمّل 5 ميكرولتر لكل بئر. س: هل يمكنني تشغيل سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة على هلام الفورمالديهايد، وإذا كان ذلك ممكنًا، فما مقدار السلم الذي يجب استخدامه؟ ج: لتشغيل سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (ssRNA Ladder) على هلام الفورمالديهايد، ستحتاج إلى استخدام كمية أكبر من الكمية الموصى بها في البروتوكول بمقدار 3 إلى 5 أضعاف (أي 12-20 ميكروغرام من السلم لكل مسار) للحصول على رؤية جيدة. س: ما هو تركيز الحمض النووي الريبوزي (RNA) في سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (NEB #N0362) وسلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى (NEB #N0364)؟ ج: نظرًا لأن سلالم الحمض النووي الريبوزي مصممة لتكون معايير للحجم وليست مخصصة للقياس الكمي، فإننا لا ننشر تركيز هذه المنتجات. معيار إصدار السلالم هو الفحص البصري للنمط الكهربائي. على الرغم من أننا نبذل قصارى جهدنا للحفاظ على ثبات شكل السلم وشدة الحزمة، إلا أن تركيز الحمض النووي الريبوزي قد يختلف بين الدفعات. لهذا السبب، لا نوصي باستخدام هذه المنتجات لأغراض القياس الكمي.