مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، N0364S، سلم الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة منخفض المدى

الفئات ذات الصلة: علامات وسلالم الحمض النووي الريبي، مواصفات علامات وسلالم الحمض النووي الريبي: محلول التخزين: 20 ملي مولار سترات الصوديوم، 1 ملي مولار EDTA، درجة الحموضة 6 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما أنواع الهلام الموصى بها لسلالم الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة (ssRNA) وثنائي السلسلة (dsRNA)؟ (N0363، N0362، N0364) ج: بشكل عام، عند العمل مع جزيئات الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة، يُنصح باستخدام هلام مُفَكِّك، ومحلول تحميل/صبغة مُفَكِّكة للعينة تحتوي إما على الفورماميد أو اليوريا، وصبغة SYBR Gold للتلوين. ترتبط صبغة SYBR Gold بشكل تفضيلي بالجزيئات أحادية السلسلة، وبالتالي تُعطي رؤية جيدة للحزم بعد الفصل الكهربائي الهلامي. في بعض الحالات، عندما تكون جزيئات الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة كبيرة الحجم، مثل سلم الحمض النووي الريبي أحادي السلسلة (N0362S)، يمكن استخدام هلام طبيعي وتلوين الهلام ببروميد الإيثيديوم. لكن تذكر أن عينات الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (ssRNA) يجب تحضيرها دائمًا باستخدام محلول تحميل/صبغة مُفسِّخة للعينات تحتوي على الفورماميد أو اليوريا. عند التعامل مع جزيئات الحمض النووي الريبوزي ثنائي السلسلة، يكفي استخدام هلام طبيعي، ومحلول تحميل/صبغة غير مُفسِّخة للعينات، وتلوين الهلام إما ببروميد الإيثيديوم أو SYBR Green أو SYBR Safe. س: ما أنواع الهلام وأصباغ التلوين التي يمكنني استخدامها مع سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى (N0364S) من NEB؟ ج: يمكن تشغيل سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى (N0364S) المُحضر إما على هلام أجاروز طبيعي بنسبة 2.0% مع محلول TBE أو هلام مُفسِّخ بنسبة 6% مع محلول TBE واليوريا (من شركة Life Technologies). يمكن تلوين الهلام باستخدام SYBR Gold أو بروميد الإيثيديوم. س: لماذا لا تظهر حزم سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى بوضوح على هلام الأجاروز بنسبة 2% مع محلول TBE؟ ج: يجب التأكد من إجراء عملية فصل الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (ssRNA) بشكل صحيح. بعد إضافة 2 ميكرولتر من سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى إلى 38 ميكرولتر من صبغة تحميل الحمض النووي الريبوزي، يجب حضانة هذا المزيج عند 90 درجة مئوية لمدة 3-5 دقائق أو عند 70 درجة مئوية لمدة 10 دقائق، ثم تبريده على الجليد لمدة دقيقتين قبل التحميل. س: لماذا تظهر حزم إضافية من سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى على هلام الفصل الكهربائي المُحَوِّل للحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة بتركيز 6% من مادة TBE-Urea؟ ج: ظهور حزم إضافية على هلام الفصل الكهربائي المُحَوِّل للحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة يشير إلى أن سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة لم يُفصل بشكل صحيح و/أو أنك قمت بتحميله بكمية زائدة. س: هل سيعمل سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى على هلامات الفصل الكهربائي المُحَوِّلة للحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة بتركيز 10% و15% من مادة TBE-Urea؟ ج: نعم. عند استخدام هلامات مُشوِّهة ذات نسبة عالية من بولي أكريلاميد لتشغيل سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى، يجب استخدام كمية أقل من السلم مقارنةً بما هو مُوصى به في البروتوكول لتشغيل هلام TBE-يوريا بنسبة 6%. على سبيل المثال، تحتاج فقط إلى 0.03-0.06 ميكرولتر من السلم لكل مسار على هلام Novex TBE-يوريا بنسبة 10% (10 آبار)، أو ≤0.03 ميكرولتر من السلم لكل مسار على هلام Novex TBE-يوريا بنسبة 15% (12 بئرًا). س: ما هو تركيز الحمض النووي الريبوزي في سلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة (NEB #N0362) وسلم الحمض النووي الريبوزي أحادي السلسلة منخفض المدى (NEB #N0364)؟ ج: نظرًا لأن سلالم الحمض النووي الريبوزي مُصممة لتكون معايير حجمية وليست مُخصصة للقياس الكمي، فإننا لا ننشر تركيز هذه المنتجات. معيار إطلاق السلالم هو الفحص البصري للنمط الكهربائي. على الرغم من أننا نبذل قصارى جهدنا للحفاظ على ثبات شكل السلم وشدة الحزم، إلا أن تركيز الحمض النووي الريبي قد يختلف بين الدفعات. ولهذا السبب، لا نوصي باستخدام هذه المنتجات لأغراض التحديد الكمي.