مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، N3011L، الحمض النووي لامدا

الفئات ذات الصلة: بلازميدات الحمض النووي والركائز. المواصفات: محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار EDTA، درجة الحموضة 8 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: هل الحمض النووي لامدا (NEB #N3011) والحمض النووي لامدا (dam-) (NEB #N3013) مثيل؟ ج: الحمض النووي لامدا N3011 مثيل، ولكننا لا نعرف تحديدًا أي مواقع A وC يتم مثيلتها، لأن المثيلة في لامدا ليست 100%. يُستخلص الحمض النووي من بكتيريا الإشريكية القولونية dam+، dcm+، EcoK+ (السلالة C190). كما توفر NEB الحمض النووي لامدا (dam-) (NEB #N3013)، والذي يُزرع في سلالة من بكتيريا الإشريكية القولونية dam-، dcm+، EcoK+ (السلالة GM33). ينقل إنزيم الميثيلاز المُشفَّر بواسطة جين dam (ميثيلاز Dam) مجموعة ميثيل إلى الموقع N6 لبقايا الأدينين في التسلسل GATC (1,2). أما إنزيم الميثيلاز Dcm، المُشفَّر بواسطة جين dcm، فيُضيف مجموعة ميثيل إلى بقايا السيتوزين الداخلية في التسلسلين CCAGG وCCTGG (1,3) عند الموقع C5. بينما يُعدِّل إنزيم الميثيلاز EcoKI، M.EcoKI، بقايا الأدينين في التسلسلين AAC(N6)GTGC وGCAC(N6)GTT. لمزيد من المعلومات، يُرجى زيارة الرابط التالي: https://www.neb.com/tools-and-resources/selection-charts/dam-dcm-and-cpg-methylation. لا تخضع جميع جزيئات الحمض النووي المعزولة من بكتيريا الإشريكية القولونية (E. coli) لنفس درجة الميثيل. بينما يخضع الحمض النووي pBR322 لتعديل كامل، فإن حوالي 50% فقط من مواقع dam في الحمض النووي لفيروس لامدا تخضع للمثيلة، ويُعزى ذلك على الأرجح إلى عدم توفر الفرصة لإنزيم المثيلة لمثيلة الحمض النووي بالكامل قبل تغليفه في رأس العاثية. 1. مارينوس، إم جي وموريس، إن آر (1973) مجلة علم البكتيريا 114، 1143-1150. PMID: 4576399 2. جير، جي إي ومودريتش، بي (1979) مجلة الكيمياء البيولوجية 254، 1408-1413. PMID: 368070 3. ماي، إم إس وهاتمان، إس (1975) مجلة علم البكتيريا 123، 768-770. PMID: 1097428 س: ما هي النهايات المتماسكة للحمض النووي لفيروس لامدا؟ ج: يحتوي الحمض النووي لامدا على 12 قاعدة، ذات نهايات أحادية السلسلة متكاملة. تسلسلها هو: 5' GGGCGGCGACCT 3' و 5' AGGTCGCCGCCC 3'. س: هل الحمض النووي لامدا لديكم خطي أم دائري؟ ج: الحمض النووي لامدا لدينا خطي. لا نبيع الحمض النووي لامدا بشكل دائري. نظريًا، يمكن ربطه لتكوين حلقات، ولكن نظرًا لكبر حجمه، يصعب تحقيق ذلك. احتمالية التقاء نهايات عدة جزيئات منفصلة من الحمض النووي لامدا أكبر بكثير من احتمالية انطواء قطعة واحدة من الحمض النووي لامدا على نفسها، إلا إذا كان المحلول مخففًا جدًا. س: ما هي الطفرات في الحمض النووي لامدا لديكم؟ ج: يحتوي الحمض النووي لامدا لدينا على 4 طفرات: -ind1 عند 37589 C->T، مما يُنشئ موقع Hind III عند 37584. -Sam7 عند 45352 G->A. Sam7 هي طفرة كهرمانية في جين مسؤول عن تحلل غشاء الخلية البكتيرية. يؤدي غياب ناتج جين S الطبيعي إلى تراكم جزيئات العاثية المعدية داخل الخلية. -cI857 عند 37742 C->T. cI857 هي طفرة حساسة للحرارة تجعل ناتج جين CI غير مستقر حراريًا. -cI857s7 تحمل أيضًا طفرة G->A عند 43082. س: ما هو تسلسل الحمض النووي لهذا الناتج؟ ج: يمكن العثور على تسلسل الحمض النووي في أداة تسلسلات وخرائط الحمض النووي.