مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، N3013L، الحمض النووي لامدا (dam-)

الفئات ذات الصلة: بلازميدات الحمض النووي والركائز. المواصفات: محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار EDTA، درجة الحموضة 8 عند 25 درجة مئوية. الأسئلة الشائعة : س: ما هو تسلسل الحمض النووي لهذا المنتج؟ ج: يمكن العثور على تسلسل الحمض النووي في أداة تسلسلات وخرائط الحمض النووي. س: هل الحمض النووي لامدا (NEB #N3011) والحمض النووي لامدا (dam-) (NEB #N3013) مثيل؟ ج: الحمض النووي لامدا N3011 مثيل، لكننا لا نعرف تحديدًا أي مواقع A وC يتم مثيلتها، لأن المثيلة في لامدا ليست 100%. تم استخلاص الحمض النووي من بكتيريا الإشريكية القولونية dam+، dcm+، EcoK+ (السلالة C190). تُوفر شركة NEB أيضًا حمض نووي لامدا (dam-) (NEB #N3013)، والذي يُزرع في سلالة من الإشريكية القولونية (E. coli) تحمل الجينات dam- وdcm+ وEcoK+ (السلالة GM33). يقوم إنزيم الميثيلاز المُشفّر بواسطة جين dam (ميثيلاز Dam) بنقل مجموعة ميثيل إلى الموقع N6 لبقايا الأدينين في التسلسل GATC (1,2). أما إنزيم الميثيلاز Dcm، المُشفّر بواسطة جين dcm، فيقوم بمثيلة بقايا السيتوزين الداخلية في التسلسلين CCAGG وCCTGG (1,3) عند الموقع C5. بينما يقوم إنزيم الميثيلاز EcoKI، M.EcoKI، بتعديل بقايا الأدينين في التسلسلين AAC(N6)GTGC وGCAC(N6)GTT. للمزيد من المعلومات، يُرجى الاطلاع على الرابط التالي: https://www.neb.com/tools-and-resources/selection-charts/dam-dcm-and-cpg-methylation. لا تخضع جميع جزيئات الحمض النووي المعزولة من بكتيريا الإشريكية القولونية لعملية مثيلة بنفس الدرجة. فبينما يكون الحمض النووي pBR322 مُعدَّلاً بالكامل، فإن حوالي 50% فقط من مواقع dam في الحمض النووي لفيروس لامدا تكون مثيلة، ويُعزى ذلك على الأرجح إلى عدم توفر الفرصة لإنزيم المثيلة لمثيلة الحمض النووي بالكامل قبل تغليفه في رأس العاثية. المراجع: 1. Marinus, MG and Morris, NR (1973) J. Bacteriol. 114, 1143–1150. PMID: 4576399 2. Geier, GE and Modrich, P. (1979) J. Biol. Chem. 254, 1408–1413. PMID: 368070 3. ماي، إم إس وهاتمان، إس. (1975) مجلة علم البكتيريا 123، 768-770. PMID: 1097428