نيو إنجلاند بيولابس، N3026S، ΦX174 هضم الحمض النووي بواسطة إنزيم HaeIII

الفئات ذات الصلة: علامات وسلالم الحمض النووي، التطبيقات، تحليل الحمض النووي، المواصفات ، القواعد، كتلة القطعة (نانوغرام)، زوج قاعدي، 1، 251، 1353، 2، 200، 1078، 3، 162، 872، 4، 112، 603، 5، 58، 310، 6، 102، 281/271، 7، 43، 234، 8، 36، 194، 9، 22، 118، 10، 13، 72، نطاق الحجم الفعال : من 72 إلى 1353 زوج قاعدي، محلول التخزين: 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار EDTA، درجة الحموضة 8 عند 25 درجة مئوية، الأسئلة الشائعة : س: لماذا فصل الحزم السفلية غير مكتمل؟ ج: تحتوي السلالم ذات الوزن الجزيئي المنخفض على شظايا صغيرة وتتطلب أوقات تشغيل طويلة لفصل الحزم بشكل فعال. لتصوير الحزم الأصغر، يُفضّل استخدام هلام ذي نسبة أعلى (حتى 3% أجاروز، ويُفضّل استخدام أجاروز منخفض الذوبان مُصمّم خصيصًا). تميل الحزم الأصغر أيضًا إلى الانتشار أكثر من الحزم الأكبر أثناء عملية الفصل الكهربائي، لذا قد يكون التشغيل بسرعة أكبر (بجهد أعلى) مفيدًا، طالما لم تتولد حرارة زائدة. في معظم الأنظمة، يمكن تشغيل هلامات بنسبة 2% أو أعلى بجهد 200 فولت لعدة ساعات دون حدوث تلف حراري مفرط. س: كيف يمكنني تحديد كمية الحمض النووي في كل حزمة من علامات الحمض النووي؟ ج: يمكن تحديد كمية الحمض النووي في كل حزمة بقسمة حجم الحزمة (بالأزواج القاعدية) على حجم جزيء الحمض النووي غير المقطوع (بالأزواج القاعدية)، ثم ضرب الناتج في إجمالي كمية علامات الحمض النووي (بالميكروغرام) المحملة على الهلام. س: هل يمكنني استخدام صبغة ميدوري الخضراء مع سلالم الحمض النووي من شركة NEB؟ ج: تتوافق سلالم الحمض النووي من NEB، بما في ذلك سلم الحمض النووي Quick-Load Purple 1 kb Plus (NEB #N0550)، مع صبغة Midori Green دون أي تداخل ملحوظ. يُرجى اتباع توصيات الشركة المصنعة للصبغة بدقة. نظرًا لانخفاض شدة الصبغة، قد تحتاج إلى تحميل ما بين 1 و2 ميكروغرام من سلم الحمض النووي لتحقيق رؤية جيدة في ظل ظروف الإضاءة فوق البنفسجية القياسية. س: هل يُمكنني استخدام صبغات SYBR® و/أو GelRed® مع سلالم الحمض النووي من NEB؟ ج: نظرًا لأن الصبغات ذات الألفة العالية لربط الأحماض النووية يُمكن أن تؤثر على هجرة الحمض النووي أثناء الفصل الكهربائي، يُوصى بشدة بتلوين الهلامات بعد الفصل الكهربائي باستخدام صبغات SYBR وGelRed. يُؤدي التلوين بعد الفصل الكهربائي إلى حساسية فائقة ويُزيل احتمال تداخل الصبغة مع هجرة الحمض النووي. على الرغم من إمكانية صب هلامات الأغاروز مسبقًا بهذه الصبغات، إلا أن هجرة و/أو دقة بعض سلالم الحمض النووي قد تتأثر. لذا، قد تتطلب بعض سلالم الحمض النووي تعديلًا أو تخفيفًا عند تشغيلها على هلامات مُجهزة مسبقًا بهذه الأصباغ. وللحصول على أفضل النتائج، يُرجى اتباع توصيات الشركة المصنعة للأصباغ وبروتوكولاتها بدقة، لا سيما فيما يتعلق بكميات التحميل. نوصي باستخدام سلم الحمض النووي 1 كيلوبايت بلس للتلوين الآمن (NEB #N0559) عند استخدام SYBR أو GelRed كأصباغ مُجهزة مسبقًا، حيث تم تحسين سلم الحمض النووي هذا خصيصًا لهذا التطبيق. بالإضافة إلى ذلك، تجنب استخدام أصباغ التحميل التي تحتوي على SDS، لأن SDS قد يتسبب في ظهور نمط نطاقات غير طبيعي في الهلامات المُجهزة مسبقًا. نوصي باستخدام صبغة تحميل الهلام، بنفسجية (6X)، خالية من SDS (NEB #B7025) لهذا التطبيق. س: لماذا يطفو سلم الحمض النووي الخاص بي خارج الآبار؟ ولماذا لا تظهر أي حزم في مسار هلام سلم الحمض النووي؟ ج: إذا تم تجميد سلم الحمض النووي الجاهز للتحميل أو صبغة التحميل 6X المرفقة به في أي وقت، فسيتشكل تدرج كثافة في محلول الفيكول داخل القارورة عند إذابته. أي حجم يتم سحبه من أعلى القارورة سيحتوي على كمية صغيرة فقط من عامل الكثافة، وبالتالي سيطفو خارج الآبار. لمنع ذلك، يُرجى خلطه جيدًا عند الاستلام وقبل الاستخدام.