مختبرات نيو إنجلاند بيولابس، P0736L، هيبارينيز II من بكتيريا البكتيرويد

يقوم إنزيم الهيبارينيز II بكسر الرابطة الجليكوسيدية بين بقايا حمض N-الكبريتات وحمض الجلوكورونيك أو حمض الإيدورونيك. التصنيفات ذات الصلة: تطبيقات الهيبارينيز، تحليل الهيبارين/HS، المواصفات ، تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم التي تُحرِّر 0.25 نانومول من السكريات قليلة التعدد غير المشبعة من هيبارين الغشاء المخاطي للخنزير في الدقيقة عند درجة حرارة 30 درجة مئوية ودرجة حموضة 7.0 في حجم تفاعل إجمالي قدره 100 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول تفاعل هيبارينيز بكتيرويدس بتركيز 1X، يُحضن عند 30 درجة مئوية. محلول التخزين: 20 ملي مولار Tris-HCl، 100 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار EDTA، 5 ملي مولار CaCl2، درجة الحموضة 7.5 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : 100 درجة مئوية لمدة دقيقة واحدة. الوزن الجزيئي الظاهري : 86 كيلو دالتون . شروط فحص الوحدة: يتم تحضين تخفيفات متسلسلة من هيبارينيز بكتيرويدس II مع 1 ملغ/مل من ركيزة الهيبارين المخاطي الخنزيري في محلول تفاعل هيبارينيز بكتيرويدس بتركيز 1X، في تفاعل حجمه 100 ميكرولتر. يُحضن مزيج التفاعل عند 30 درجة مئوية. يتم الكشف عن تحرر السكريات قليلة الوحدات غير المشبعة بواسطة مطيافية الأشعة فوق البنفسجية في الوقت الحقيقي عند 232 نانومتر. الأسئلة الشائعة : س: ما هي إنزيمات هيبارينيز بكتيرويدس؟ ج: إنزيمات الهيبارينيز، وتُسمى أيضًا إنزيمات لياز الهيبارين، هي إنزيمات تكسر الرابطة الجليكوسيدية بين الهكسوزامينات وأحماض اليورونيك، ومن المعروف أنها تكسر سلاسل الهيبارين وHS بشكل انتقائي، عبر آلية إزالة. تُكوّن إنزيمات الهيبارينيز رابطة مزدوجة على الطرف غير المُختزل لحمض اليورونيك، والتي تمتص عند 232 نانومتر، ويمكن استخدامها للكشف عن منتجات السكريات قليلة التعدد والسكريات الثنائية. س: ما الفرق بين إنزيمات الهيبارينيز I وII وIII من بكتيريا البكتيرويد؟ ج: يكسر الهيبارينيز I سلاسل الهيبارين/HS عالية الكبرتة، بينما يكسر الهيبارينيز III سلاسل HS أقل كبرتة، أما الهيبارينيز II فيكسر مناطق ذات كبرتة عالية ومنخفضة على كل من الهيبارين وHS. يمكن أن يؤدي استخدام إنزيمات الهيبارينيز I وII وIII معًا إلى تحلل شبه كامل لسلاسل عديد السكاريد الهيبارين/HS إلى ثنائيات السكاريد. س: هل يمكن استخدام إنزيمات الهيبارينيز I وII وIII من بكتيريا Bacteroides معًا في عملية هضم واحدة؟ ج: نعم، جميع إنزيمات الهيبارينيز الثلاثة مزودة بنفس محلول التفاعل (تركيبة 1X: 20 ملي مولار Tris-HCl، درجة الحموضة 7، 100 ملي مولار NaCl، 1.5 ملي مولار CaCl2)، ودرجة حرارة الحضانة المثلى لها هي 30 درجة مئوية. س: ما هو نطاق الرقم الهيدروجيني الأمثل لإنزيم الهيبارينيز II من بكتيريا Bacteroides؟ ج: يكون إنزيم الهيبارينيز II من بكتيريا Bacteroides أكثر نشاطًا عند درجة حموضة تتراوح بين 7.0 و8.0. س: هل يتم تنشيط إنزيم الهيبارينيز II من بكتيريا Bacteroides بواسطة الكالسيوم؟ ج: نعم، يكون إنزيم الهيبارينيز II من بكتيريا Bacteroides أكثر نشاطًا عند تركيز CaCl2 يتراوح بين 1.5 و5.0 ملي مولار. يحتوي كل من محلول التخزين ومحلول التفاعل على الكالسيوم لهذا السبب.