نيو إنجلاند بيولابس، P0770S، p0770-idez-protease-igg-specific

إنزيم IdeZ البروتيني (المختص بالأجسام المضادة IgG) هو إنزيم بروتيني مُعاد التركيب، متخصص في الأجسام المضادة، ويتعرف على فئات IgG الفرعية لدى الإنسان، والأغنام، والقرود، والأرانب، وبعض الفئران. يقوم هذا الإنزيم بقطع IgG بشكل خاص عند موقع تعرف واحد أسفل منطقة المفصل، لينتج عنه مجموعة متجانسة من شظايا F(ab´)2 وFc. يتميز إنزيم IdeZ البروتيني بقدرته على قطع IgG2a الفأري بكفاءة أعلى من إنزيم IdeS. التصنيفات ذات الصلة: الإنزيمات البروتينية، تطبيقات تحليل البروتينات، العلاجات الحيوية وتحليل الأجسام المضادة، مواصفات البروتينات، تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لقطع أكثر من 95% من 1 ميكروغرام من IgG البشري، خلال 15 دقيقة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول جليكوبازر 2 بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول جليكوبازر 2 بتركيز 1X، فوسفات الصوديوم 50 ملي مولار (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين: 20 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار إيدتا، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الوزن الجزيئي النظري: 35578 كيلو دالتون. شروط فحص الوحدة : يتم تحضين تخفيفات متسلسلة من إنزيم IdeZ (المختص بـ IgG) مع 1 ميكروغرام من IgG البشري ومحلول جليكوبازر 2 بتركيز 1X في تفاعل حجمه 10 ميكرولتر. يُحضن مزيج التفاعل لمدة 15 دقيقة عند 37 درجة مئوية. يتم تصوير فصل نواتج التفاعل باستخدام SDS-PAGE. ملاحظات التخزين: تجنب دورات التجميد/الذوبان المتكررة. الأسئلة الشائعة : س: ما هي ميزة إنزيم IdeZ مقارنةً بإنزيم IdeS؟ ج: يتمتع كل من إنزيم IdeZ وإنزيم IdeS بنفس الخصوصية؛ حيث يقومان بقطع نفس الموقع المحدد أسفل منطقة المفصل في IgG. ومع ذلك، يتميز إنزيم IdeZ بتعدد استخداماته، إذ يقوم بقطع IgG2a الفأري بكفاءة أعلى من إنزيم IdeS. س: هل إنزيم IdeZ نشط في محلول ملحي مُخفَّف بالفوسفات (PBS)؟ ج: نعم، إنزيم IdeZ نشط في محلول PBS. كما يعمل إنزيم IdeZ في مجموعة من المحاليل المنظمة ذات درجة حموضة تتراوح من 6.0 إلى 9.0. ويُلاحظ انخفاض ملحوظ في نشاطه عند درجة حموضة 5.5 وما دون. المحلول المنظم الموصى به هو 1X Glycobuffer 2 (50 ملي مولار فوسفات الصوديوم، درجة حموضة 7.5). س: هل يمكن استخدام حبيبات البروتين A المغناطيسية (NEB# S1425S) لإنشاء مجموعات من أجزاء Fc وFab بعد القطع باستخدام إنزيم IdeZ؟ ج: نعم، يمكن استخدام حبيبات البروتين A المغناطيسية (NEB# S1425S) لإنشاء مجموعات من أجزاء Fc وFab بعد فصلها بواسطة إنزيم IdeZ Protease. سيرتبط جزء Fc بالحبيبات، بينما سيبقى جزء Fab في المحلول الطافي. س: هل يستطيع إنزيم IdeZ Protease فصل أنواع IgG الأخرى غير البشرية؟ ج: إنزيم IdeZ Protease فعال على IgG البشري. ويمكن استخدامه أيضًا لتحضير أجزاء IgG2a وIgG3 من الفئران مع فترة حضانة ممتدة. كما يفصل إنزيم IdeZ Protease العديد من بروتينات الاندماج Fc، بالإضافة إلى الأجسام المضادة المقترنة بالأدوية (ADCs). إنزيم IdeZ Protease فعال على بعض أنواع IgG من القرود والأرانب والأغنام. لا يفصل إنزيم IdeZ Protease IgG من الماعز أو الأبقار أو الخنازير أو الجرذان. كما أنه لا يفصل IgG1 أو IgG2b من الفئران. س: هل يستطيع إنزيم IdeZ Protease شطر أنواع الأجسام المضادة الأخرى غير IgG؟ ج: لا، إنزيم IdeZ Protease فعال فقط على IgG. وهو غير فعال على IgA أو IgD أو IgE أو IgM. س: هل يمكن استخدام إنزيم PNGase F مع إنزيم IdeZ Protease في الظروف الطبيعية لإزالة السكريات من الجزء Fc من الجسم المضاد؟ ج: نعم، يمكن استخدام إنزيم PNGase F وإنزيم IdeZ Protease معًا في خطوة واحدة لتفتيت IgG وإزالة السكريات من الجزء Fc. يمكن الاطلاع على ظروف التفاعل النموذجية في بروتوكول الهضم المتزامن لـ IgG باستخدام إنزيم IdeZ Protease وإنزيم PNGase F. س: ما هو موقع الشطر لإنزيم IdeZ Protease (المختص بـ IgG)؟ أ: IgG1، IgG3، IgG4 البشري: CPAPELLG / GPSVF.. IgG2 البشري: CPAPPVA / GPSVF IgG2a الفأري: CPAPELLG / GPSVF