مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، P0773S، إندوغليكوسيراميداز I (EGCase I)

الفئات ذات الصلة مواصفات الإندوغليكوزيداز تعريف الوحدة تم تعريف وحدة واحدة من R. triatomea EGCase I على أنها كمية الإنزيم المطلوبة لتحليل 1 ميكرومول من الغانغليوزيد GM1a في الدقيقة عند 37 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل EGCase I بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول تفاعل EGCase I بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات الصوديوم، 0.1% تريتون X-100 (الأس الهيدروجيني 5.2 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين : 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 20 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار EDTA، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري : 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. الوزن الجزيئي الظاهري : 50 كيلو دالتون . شروط فحص الوحدة: يتم تحضين تخفيفات متسلسلة من EGCase I مع 10 نانومول من ركيزة GM1a في محلول تفاعل EGCase I بتركيز 1X في تفاعل حجمه 10 ميكرولتر. يُحضن مزيج التفاعل لمدة 5 دقائق عند 37 درجة مئوية. تُوسَم السكريات المُحرَّرة بـ 2-AB، وتُحلَّل نواتج التفاعل باستخدام كروماتوغرافيا التفاعل الهيدروفيلي السائلة فائقة الأداء مع الكشف الفلوري. الأسئلة الشائعة: س: هل يمكن تخزين الإنزيم في درجات حرارة أخرى؟ ج: يمكن تخزين إنزيم EGCase I عند 4 درجات مئوية لمدة تصل إلى شهر واحد، وعند -20 درجة مئوية لفترات أطول. س: كيف يُمكنني تحسين التفاعل؟ ج: يجب تحديد أوقات الحضانة المثلى وتركيزات الإنزيم تجريبيًا لكل ركيزة على حدة. ظروف التفاعل النموذجية هي كالتالي: حضانة 2 نانومول من غليكوسفينغوليبيد مع 6 وحدات دولية (1 ميكرولتر) من EGCase I لمدة 16 ساعة عند 37 درجة مئوية في محلول منظم من أسيتات الصوديوم بتركيز 50 ملي مولار، ودرجة حموضة 5.2، يحتوي على 0.1% من Triton X-100. حجم التفاعل الكلي 20 ميكرولتر. قد تتطلب الركائز الأكثر تعقيدًا كمية إضافية من EGCase I للحصول على أفضل النتائج. س: ما هي الركائز الإضافية التي يحللها إنزيم EGCase I؟ ج: انظر الركائز المدرجة في الجدول 1 أدناه، والمقتبس من: Albrecht, S. et al. (2016) Analytical Chemistry 88, 4795-4802. الجدول 1. خصوصية الركيزة لإنزيم إندوغليكوسيراميداز I المؤتلف. يسرد الجدول أدناه كميات السكريات المتحررة من معايير الغليكوليبيد (2 نانومول) باستخدام 2 وحدة دولية من إنزيم R. triatomea rEGCase I بعد الحضانة عند 37 درجة مئوية لمدة 16 ساعة. بنية الغليكوليبيد الركيزة، نسبة التحلل المائي، الغانغليوزيدات: GM3 Neu5Acα2-3Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100، GM1a Galβ1-3GalNAcβ1-4(Neu5Acα2-3) Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100، FGM1 Fucα1-2Galβ1-3GalNAcβ1-4 (Neu5Acα2-3)Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100، GD3 Neu5Acα2-8Neu5Acα2-3Galβ1-4 Glcβ1-1'Cer 100، GD1a Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-4 (Neu5Acα2-3)Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100 GD1b Galβ1-3GalNAcβ1-4(Neu5Acα2-8 Neu5Acα2-3)Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100 GT1b Neu5Acα2-3Galβ1-3GalNAcβ1-4 (Neu5Acα2-8Neu5Acα2-3)Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100 Globosides Gb4 GalNAcβ1-3Galα1-4Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100 سيريبروسيدس GlcCer Glcβ1-1'Cer 100 GalCer Galβ1-1'Cer 5-10 سلفاتيد HSO3-3Galβ1-1'Cer 0 سايكوسين Galβ1-1'سفينجوزين 0 لاكسير Galβ1-4Glcβ1-1'Cer 100 س: هل يمكنني شراء كميات كبيرة من إنزيم موجود ضمن برنامج "إنزيم للابتكار"؟ ج: نعم، إذا كنت بحاجة إلى كميات كبيرة من إنزيم ضمن برنامج "إنزيم للابتكار"، يُرجى التواصل مع شركة NEB عبر البريد الإلكتروني EnzymesForInnovation@neb.com. يُرجى العلم بأن التوافر قد يكون محدودًا، وبالتالي قد تطول مدة التسليم للطلبات الكبيرة. كما قد يلزم إجراء اختبارات إضافية لمراقبة الجودة لتلبية احتياجاتك وتطبيقاتك المحددة. س: ما هي إنزيمات الابتكار؟ ج: إنزيمات الابتكار (EFI) هو مشروع أطلقته شركة NEB لتوفير إنزيمات فريدة للمجتمع العلمي، بهدف تمكين اكتشاف تطبيقات جديدة ومبتكرة. تتميز هذه الإنزيمات بخصائص فريدة وتخصصات مميزة غير متوفرة تجاريًا في أي مكان آخر، وبجودة عالية تليق بسمعة NEB. خريجو برنامج "إنزيمات الابتكار" هم إنزيمات انتقلت من مرحلة التطبيقات غير المعروفة أو الاستكشافية إلى أن أصبحت حجر الزاوية في تطبيق محدد. إذا كانت لديك فكرة عن "إنزيم للابتكار" مع تطبيق مقترح قد يكون مفيدًا، يُرجى مراسلتنا عبر البريد الإلكتروني على EnzymesForInnovation@neb.com. لمزيد من المعلومات، يُرجى مشاهدة الفيديو.