نيو إنجلاند بيولابس، P8118S، بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة

الفئات ذات الصلة: أدوات البروتين، البروتيازات، تطبيقات تنقية البروتين، شطر البروتينات المدمجة، أدوات تحليل البروتين. المواصفات: تعريف الوحدة: تقوم وحدة واحدة من بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة بشطر 2 ميكروغرام من بروتين MBP المدمج، MBP5-TEV-paramyosin ΔSal، بنسبة اكتمال 95% في حجم تفاعل إجمالي قدره 10 ميكرولتر خلال 5 ساعات عند درجة حرارة 4 درجات مئوية في محلول Tris-HCl بتركيز 50 ملي مولار (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية) مع EDTA بتركيز 0.5 ملي مولار وDTT بتركيز 1 ملي مولار. درجة حرارة التخزين: -20 درجة مئوية. شروط التفاعل: محلول تفاعل بروتياز TEV بتركيز 1X، يُحضن عند 4 درجات مئوية. محلول تفاعل بروتياز TEV بتركيز 1X: 50 ملي مولار Tris-HCl، 0.5 ملي مولار EDTA، 1 ملي مولار DTT (الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية). محلول التخزين : 50 ملي مولار Tris-HCl، 250 ملي مولار NaCl، 1 ملي مولار TCEP، 1 ملي مولار EDTA، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.5 عند 25 درجة مئوية. التعطيل الحراري : 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. الوزن الجزيئي الظاهري : 28 كيلو دالتون. الأسئلة الشائعة : س: هل يمكنني استخدام بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118) أثناء غسيل بروتين الاندماج؟ ج: نعم. يمكن إضافة بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة إلى العينة قبل أو أثناء الغسيل الكلوي طالما أن المحلولين متوافقان مع نشاط بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة. س: هل يمكن استخدام بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118) عند درجات حرارة أعلى من 4 درجات مئوية؟ ج: نعم. يمكن استخدام بروتياز TEV النشط في درجات حرارة تتراوح بين 4 و37 درجة مئوية. يمكن تقليل وقت حضانة التفاعل عند رفع درجة حرارة الحضانة. س: هل يمكنني تعطيل بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118) بعد انتهاء التفاعل؟ ج: نعم. يمكن تعطيل بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة بالحرارة عن طريق حضانة التفاعل عند 65 درجة مئوية لمدة 10 دقائق. س: هل يمكن لبروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118) أن يفصل بروتينًا اندماجيًا مرتبطًا بعمود تقارب؟ ج: على الرغم من أننا أثبتنا بنجاح قدرة بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة على فصل علامة من بروتين مُعلَّم مُثبَّت على راتنج تقارب، إلا أننا نوصي باختبار تفاعل الفصل على البروتين المدمج المُستخلص من عمود التقارب أولًا لتحديد أفضل الظروف. س: هل يجب عليّ إجراء غسيل كلوي للتفاعل قبل الفصل باستخدام بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118)؟ ج: نوصي بإجراء غسيل كلوي للبروتين المدمج إذا كان المحلول المنظم يحتوي على أكثر من 2 مولار من اليوريا، أو أكثر من 1 مولار من هيدروكلوريد الغوانيدين، أو أكثر من 30% من الجلسرين، أو قيم أس هيدروجيني أقل من 6 أو أعلى من 9، أو مثبطات بروتياز السيستين. س: ما الفرق بين بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة (NEB #P8118) وبروتياز TEV (NEB #P8112)؟ ج: تم تصميم بروتياز TEV النشط في درجات الحرارة المنخفضة ليكون أكثر نشاطًا، خاصةً في درجات الحرارة المنخفضة. تُظهر بياناتنا أن إنزيم TEV Protease النشط في درجات الحرارة المنخفضة أسرع بثلاث مرات من إنزيم TEV Protease العادي عند درجة حرارة 4 مئوية وعند درجات حرارة أعلى. يمكن استخدام كلا الإنزيمين في نفس محلول التفاعل 1X TEV Protease، ويمكن تعطيلهما عند درجة حرارة 65 مئوية لمدة 10 دقائق.