نيو إنجلاند بيولابس، R0111L، NdeI

تمت إعادة صياغة إنزيم NdeI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10133989. الفئات ذات الصلة : إنزيمات القطع المحددة: لا، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت: الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 75%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف أ: محلول التخزين ، 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل بالحرارة عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة . الأسئلة الشائعة : س: هل إنزيم NdeI مؤهل لتوفير الوقت؟ ج: نعم. يقوم إنزيم NdeI بهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي في 5 دقائق باستخدام 1 ميكرولتر من الإنزيم في ظل ظروف التفاعل الموصى بها. س: هل نشاط إنزيم NdeI حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. نشاط إنزيم NdeI غير حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات للحمض النووي الركيزة. للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل لإنزيم NdeI أي نظائر متماثلة؟ ج: نعم. FauNDI هو نظير متماثل لإنزيم NdeI. للحصول على أحدث المعلومات حول الإيزوشيزومرات/النيووشيزومرات، يُرجى الرجوع إلى REBASE. س: يبدو أن إنزيم NdeI يهضم الحمض النووي الخاص بي بشكل صحيح، ولكن عندما أحاول ربطه، لا أحصل على أي مستعمرات. هل هناك تفسير محتمل لما ألاحظه؟ ج: إنزيم NdeI إنزيم قوي جدًا. إذا تم هضم الحمض النووي لفترات طويلة، فقد وجدنا أدلة على أن الإنزيم سيزيل بعض النيوكليوتيدات الإضافية. لا يُنصح بهضم الحمض النووي باستخدام NdeI لأكثر من 4 ساعات. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، ولكنها مصممة ومؤهلة أيضًا لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مع صبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X)؟ ج: يتم تزويد جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد NEB غير HF بصبغة تحميل الجل، أرجوانية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل يمكنك معرفة ذلك هل يمكنك إخباري بالمزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1، وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1، وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.