مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0125S، NlaIII

الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة: لا، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت: الاستنساخ السريع: قم بتسريع عمليات الاستنساخ الخاصة بك باستخدام الكواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي ΦX174 RF I في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: <10%، NEBuffer™ r2.1: <10%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيديتات ثنائي الصوديوم، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية ، يُسخن. تعطيل الإنزيم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. ملاحظات الشحن: يُشحن على ثلج جاف. الأسئلة الشائعة : س: هل يُثبط الملح إنزيم NlaIII؟ ج: نعم، يُثبط كل من كلوريد الصوديوم وكلوريد البوتاسيوم نشاط الإنزيم، بينما لا يُثبطه كبريتات الأمونيوم. يُوصى بغسل الإنزيم بمحلول إيثانول 70% بعد الترسيب أو الغسيل الكلوي بالتنقيط. س: ما هي شروط تخزين إنزيم NlaIII؟ ج: يجب تقسيم إنزيم NlaIII إلى حصص صغيرة وتخزينه عند درجة حرارة -80 درجة مئوية؛ ويحتفظ الإنزيم بنشاطه الكامل لمدة 3 أشهر عند تخزينه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية. س: هل يُنتج إنزيم NlaIII نهايات متوافقة شائعة الاستخدام؟ ج: يقوم الإنزيم بقطع الحمض النووي ليترك امتداد CATG 3' الذي يمكن ربطه بالحمض النووي (GCATG/C) المقطوع بواسطة إنزيم SphI. س: هل يُوصى بهضم إنزيم NlaIII لفترة طويلة؟ ج: لا يُنصح بفترة حضانة تزيد عن ثلاث ساعات نظرًا لعدم استقرار إنزيم NlaIII. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرت إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الموصى به من NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبط الأملاح الموجودة في التفاعل إنزيمات التقييد النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية). قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي تحتوي على مستويات عالية من الأملاح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من حجم التفاعل الكلي. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل حجم التفاعل الكلي وفقًا لذلك. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تُزوَّد بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تُزوَّد بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل صبغ، بنفسجي (6X) س: هل هذا؟ هل هذا الإنزيم حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: لا. هذا الإنزيم غير حساس لـ dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة صفحة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذه الميزة بنفس السعر. س: هل تتأثر فعالية الإنزيمات المخزنة عند -80 درجة مئوية بعد عدة دورات من التجميد والذوبان؟ ج: حافظت الإنزيمات التالية على فعاليتها الكاملة عند اختبارها لعشر دورات من التجميد والذوبان. إذا كنت بحاجة إلى أكثر من عشر دورات، فننصح بتقسيم الإنزيم إلى أجزاء أصغر وتجميد كل جزء عند -80 درجة مئوية. Cac8I EagI-HF I-SceI KasI NlaIII ملاحظة: حافظ FseI على فعاليته الكاملة لخمس دورات فقط من التجميد والذوبان.