مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0140T، PstI

الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة PR، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت، BioBrick®، التجميع، الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ الخاصة بك باستخدام الكواشف من NEB. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية PstI المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 75%، NEBuffer™ r2.1: 75%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 50%. توافق المخفف: محلول التخزين المخفف C: يحتوي على: 250 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 10 ملي مولار Tris-HCl، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، 0.15% Triton® X-100. الرقم الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية ، التثبيط الحراري: 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة، حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: ما هو نشاط PstI عند 25 درجة مئوية؟ ج: يكون نشاط PstI بنسبة 50-75% عند 25 درجة مئوية. س: هل يُستخدم PstI في تقنيات خاصة؟ ج: نعم، يُستخدم PstI في تحديد النمط الجيني للحمض النووي. س: متى يُصبح النشاط النجمي مشكلة لـ PstI؟ ج: في ظروف الرقم الهيدروجيني المرتفع، وانخفاض الملح، وارتفاع نسبة الجلسرين؛ قد يُسبب 8% من ثنائي ميثيل سلفوكسيد (DMSO) نشاطًا نجميًا. (Malyguine et al. (1980). Gene 8: 163-177). س: ما هو الوزن الجزيئي لـ PstI؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لـ PstI 37.37 كيلو دالتون بناءً على بيانات التسلسل. س: هل يتم تثبيط PstI بالمثيلة؟ ج: لا يُثبَّط إنزيم PstI بواسطة مثيلة Dam أو Dcm أو CpG. مع ذلك، يُثبَّط بواسطة أنواع معينة من المثيلة الموجودة أحيانًا في الحمض النووي النباتي. غالبًا ما تحتوي النباتات على مثيلة CAG و/أو CTG، مما يؤدي إلى مواقع MTG و/أو MAG، حيث M هي 5mC. يُثبَّط إنزيم PstI بواسطة هذا النوع من المثيلة. وهذا يختلف عن مثيلة CpG (MG مقابل MTG وMAG). للحصول على معلومات حديثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. كما أن إنزيم PstI لا يقطع AGCTGCAG عند مثيلته بواسطة إنزيم AluI methylase. س: هل يُثبَّط إنزيم PstI بواسطة dUTP المُدمج في الموقع؟ ج: نعم. يُقلل دمج dUTP بنسبة 100% من انقسام PstI إلى 25%. (Glenn et al., 1994). التقنيات الحيوية 17: 1086-1090. س: هل يزيد السبيرميدين من النشاط؟ ج: لا، يُثبّط السبيرميدين بتركيز 0.5-2 ملي مولار عملية الهضم بواسطة إنزيم PstI (كوسمانين وبوسو (1985). FEBS Lett. 179: 17-20). كما يُثبّط السبيرميدين نشاط إنزيم PstI (بينغود (1985). Eur. J. Biochem. 147:150-109). س: هل توجد تسلسلات محيطة محددة تُنتج مواقع بطيئة أو مقاومة؟ ج: يُضفي وجود تتابعات متجاورة من أزواج قواعد GC مقاومة كبيرة للانقسام. أرمسترونغ وباور (1982). NAR 10: 993-1007. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المؤهلة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يُمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مُصممة ومؤهلة لتحمّل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: ما هو إنزيم التقييد من NEB؟ يتم تزويد الإنزيمات بصبغة تحميل جل، أرجواني (6X)؟ ج: يتم تزويد جميع إنزيمات تقييد HF ومعظم إنزيمات تقييد NEB غير HF بصبغة تحميل جل، أرجواني (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI Apai BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * جميع إنزيمات التقييد HF مزودة أيضًا بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X) س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من BSA إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسعد NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.