نيو إنجلاند بيولابس، R0141S، SmaI

تمت إعادة صياغة SmaI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10156748. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة S، إنزيمات قطع مؤهلة لتوفير الوقت. التطبيقات: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (هضم HindIII) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: <10%، NEBuffer™ r2.1: <10%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين: 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 مل EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل بالحرارة عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: مُثبَّطة. النشاط عند درجة حرارة 25 درجة مئوية: 100%. الأسئلة الشائعة : س: لماذا لا يقوم SmaI بالقطع؟ ج: 1. يحتاج SmaI إلى أيونات البوتاسيوم (K+) ليعمل. استخدمه في محلول rCutSmart، أو أضف إليه كلوريد البوتاسيوم (KCl). 2. يتم تثبيط SmaI بواسطة مثيلة CpG. 3. للهضم المطوّل (أكثر من ساعة)، حضّن عند 25 درجة مئوية. س: هل يتأثر SmaI بالمثيلة؟ ج: يتم تثبيط SmaI بواسطة مثيلة CpG. للحصول على معلومات محدّثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: ما الفرق بين SmaI ونظيره XmaI؟ ج: يُخلّف إنزيم XmaI امتدادًا بطول 5'، بينما يُخلّف إنزيم SmaI نهايات غير لاصقة. ولا يتأثر إنزيم XmaI بمثيلة CpG. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم SmaI؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم SmaI 28634 بناءً على بيانات التسلسل. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يُمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مُصممة ومُعتمدة لتحمّل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرتُ إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الذي أوصت به NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبَّط إنزيمات القطع النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلولي NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات التركيز الملحي العالي)، بفعل الملح في التفاعل. قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي ذات مستويات عالية من الملح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبِّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: ما هي إنزيمات القطع من NEB المُزوَّدة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات القطع HF ومعظم إنزيمات القطع غير HF من NEB مُزوَّدة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل يمكنك معرفة ذلك هل يمكنك إخباري بالمزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1، وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1، وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: في محاولة لتوحيد ظروف التفاعل، تم تغيير درجة حرارة التحضين الموصى بها لكل من ApaI (NEB #R0114) وBaeI (NEB #R0613) وBsrDI (NEB #R0574) وSmaI (NEB #R0141). ما هي درجة حرارة التحضين التي يجب استخدامها؟ ج: يمكنك التحضين بأمان عند أي من درجتي الحرارة. يُرجى ملاحظة أنه بالنسبة لـ SmaI، نقترح التحضين عند 25 درجة مئوية في حال إجراء عمليات هضم مطولة (أكثر من ساعة). س: هل تكون بعض إنزيمات التقييد أكثر نشاطًا عند درجات حرارة تحضين أعلى من الموصى بها؟ ج: إنزيمات التقييد من NEB نشطة بنسبة 100% عند درجة حرارة التحضين الموصى بها في المحلول المنظم الموصى به والمرفق مع كل إنزيم. مع بعض إنزيمات التقييد المعزولة من الكائنات المحبة للحرارة، قد تلاحظ زيادة في النشاط عند درجات حرارة تحضين أعلى. لا نوصي بزيادة درجة الحرارة حيث قد تظهر أنشطة نوكلياز إضافية عند درجات حرارة غير موصى بها.