مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0145L، XbaI

يتوفر أيضًا كاشف من الدرجة GMP. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة TZ، إنزيمات قطع محددة مؤهلة لتوفير الوقت. التطبيقات: BioBrick®، التجميع، الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (dam-/HindIII) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: <10%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 75%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف A، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل بالحرارة عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: محجوبة بتداخل مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: هل يتأثر XbaI بالمثيلة؟ ج: يتم حجب XbaI بتداخل مثيلة dam. إذا كان موقع التعرف على XbaI مسبوقًا بـ GA أو متبوعًا بـ TC، فإن إنزيم مثيلة Dam الموجود في معظم سلالات استنساخ الإشريكية القولونية سيقوم بمثيلة موقع GATC. على سبيل المثال، سيتم حجب مواقع XbaI gaTˆCTAGA وTˆCTAGAtc بالمثيلة. لتجنب مثيلة dam، استخدم سلالة تفتقر إلى dam مثل الإشريكية القولونية dam-/dcm- المؤهلة (#C2925). للحصول على معلومات محدثة حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يجب عليّ تحضير عملية الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المعتمدة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومعتمدة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل الصبغ، الأرجواني (6X) س: هل NEB هل تُقدم شركة NEB أي إنزيمات تقييد خالية من الألبومين البقري (BSA) و/أو من أصل حيواني لتسلسل البلازميدات في تطوير لقاحات mRNA؟ ج: نعم، قامت NEB بتطوير بعض إنزيمات التقييد (بما في ذلك BspQI، وهو نظير SapI) بدون مكونات مشتقة من الحيوانات، ولا يحتوي تركيبها النهائي على الألبومين البقري. بالإضافة إلى ذلك، لدينا العديد من إنزيمات التقييد المتاحة بدون الألبومين البقري أو أي مكونات أخرى مشتقة من الحيوانات في تركيبها النهائي. تشمل هذه القائمة: BbsI-HF، BsaI-HFv2، BspQI، وهو نظير LguI، ومتوفر الآن بدرجة GMP*، BspQI-HF، ClaI، HindIII-HF، PacI، SapI، SpeI، SwaI، XbaI، XhoI، XmnI. يمكن تطوير إنزيمات أخرى حسب الطلب. يُرجى الاستفسار هنا. * "GMP Grade" و"GMP-grade" مصطلحات تجارية تستخدمها NEB لوصف المنتجات المصنعة أو المُنجزة في منشأة NEB في رولي. صُمم مصنع رولي لتصنيع المنتجات وفقًا لبنية تحتية وضوابط عمليات أكثر صرامة، وذلك لتحقيق مواصفات منتجات أكثر دقة وتلبية متطلبات العملاء. تُصنّع المنتجات في مصنع رولي التابع لشركة NEB وفقًا لمعايير نظام إدارة الجودة ISO 9001 وISO 13485. مع ذلك، لا تقوم NEB حاليًا بتصنيع أو بيع المنتجات المعروفة باسم المكونات الصيدلانية الفعالة (APIs)، كما أنها لا تُصنّع منتجاتها بما يتوافق مع جميع لوائح ممارسات التصنيع الجيدة الحالية. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). نعمل حاليًا على تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل يمكن تخزين صبغة تحميل الجل، بنفسجي 6X (B7024) في درجات حرارة منخفضة؟ ج: درجة حرارة التخزين الموصى بها لصبغة تحميل الجل، بنفسجي 6X، هي درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية). عادةً، قد يترسب كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) من المحلول عند تخزين الصبغة في درجات حرارة منخفضة. يمكن التخلص من هذا الراسب الطفيف بترك القارورة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة، أو تسخينها برفق لمدة 10 دقائق. يُرجى رج القارورة عدة مرات قبل الاستخدام لإعادة المحلول إلى حالته المتجانسة.