مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0146M، XhoI

تمت إعادة صياغة XhoI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10161948. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة TZ، إنزيمات القطع المحددة الموفرة للوقت. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من شظايا الحمض النووي λ (هضم HindIII) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 75%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف أ: محلول التخزين ، 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار داي ثيو ثريتول، 0.1 ملي مولار إيدتا، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: ضعيفة. الأسئلة الشائعة: س: لماذا لا يقطع XhoI؟ ج: 1. يعيقه مثيلة CpG. 2. قد تتطلب البلازميدات فائقة الالتفاف كمية من XhoI تصل إلى 10 أضعاف الكمية المطلوبة لهضم الحمض النووي الخطي بشكل كامل. س: هل ينتج XhoI نهايات متوافقة شائعة الاستخدام؟ ج: يقطع XhoI ليترك نتوءًا 5' يمكن ربطه بالشظايا الناتجة عن هضم SalI وAvaI. س: ما الفرق بين XhoI ونظيره PaeR71؟ ج: تسلسل القطع لـ XhoI مطابق لتسلسل PaeR71. ومع ذلك، فقد ثبت تجريبيًا أن التسلسل ctCTCGAG مقاوم للقطع بواسطة PaeR71. يمكن تعطيل إنزيم XhoI بالحرارة، بينما لا يمكن تعطيل إنزيم PaeR71. ويتم تثبيط كليهما بواسطة مثيلة CG. س: ما هو الوزن الجزيئي لإنزيم XhoI؟ ج: يبلغ الوزن الجزيئي لإنزيم XhoI 26 كيلو دالتون بناءً على تقدير PAGE. س: ما هو نشاط إنزيم XhoI عند 25 درجة مئوية؟ ج: يكون إنزيم XhoI نشطًا بنسبة 50-75% عند 25 درجة مئوية. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني إجراء عملية الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل صبغ، بنفسجي (6X) س: هل هذا هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو Dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تتأثر بمثيلة CpG. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل تُوفر NEB أي إنزيمات تقييد خالية من BSA و/أو خالية من المكونات الحيوانية لتخطيط البلازميدات لتطوير لقاحات mRNA؟ ج: نعم، قامت NEB بتطوير بعض إنزيمات التقييد (بما في ذلك BspQI، وهو نظير SapI) بدون مكونات مشتقة من الحيوانات، ولا يظهر BSA في تركيبتها النهائية. بالإضافة إلى ذلك، لدينا العديد من إنزيمات التقييد المتاحة بدون BSA أو أي مكونات أخرى مشتقة من الحيوانات في تركيبتها النهائية. تتضمن هذه القائمة: BbsI-HF، BsaI-HFv2، BspQI (نظير LguI)، BspQI-HF (متوفر الآن بدرجة GMP*)، ClaI، HindIII-HF، PacI، SapI، SpeI، SwaI، XbaI، XhoI، XmnI. يمكن تحضير إنزيمات أخرى حسب الطلب. يُرجى الاستفسار هنا. * "درجة GMP" و"درجة GMP" مصطلحان تجاريان تستخدمهما شركة NEB لوصف المنتجات المصنعة أو النهائية في منشأة Rowley التابعة لها. صُممت منشأة Rowley لتصنيع المنتجات وفقًا لبنية تحتية وضوابط عمليات أكثر صرامة لتحقيق مواصفات منتجات أكثر دقة وتلبية متطلبات العملاء. تُصنع المنتجات في منشأة Rowley التابعة لشركة NEB وفقًا لمعايير نظام إدارة الجودة ISO 9001 وISO 13485. مع ذلك، لا تقوم NEB حاليًا بتصنيع أو بيع المنتجات المعروفة باسم المكونات الصيدلانية الفعالة (APIs)، كما أنها لا تُصنّع منتجاتها بما يتوافق مع جميع لوائح ممارسات التصنيع الجيدة الحالية. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصل (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل يمكن تخزين صبغة تحميل الجل، البنفسجي 6X (B7024) في درجات حرارة منخفضة؟ ج: درجة حرارة التخزين الموصى بها لصبغة تحميل الجل، البنفسجي 6X، هي درجة حرارة الغرفة (25 درجة مئوية). عادةً، قد يترسب محلول كبريتات دوديسيل الصوديوم (SDS) عند تخزين الصبغة في درجات حرارة منخفضة. يمكن التخلص من هذا الراسب الطفيف بترك القارورة في درجة حرارة الغرفة لمدة ساعة، أو بتسخينها برفق لمدة 10 دقائق. رجّ القارورة جيدًا عدة مرات قبل الاستخدام لإعادة المحلول إلى حالته المتجانسة.