مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0149T، TaqI-v2

الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة TZ، تطبيقات إنزيمات القطع المحددة المؤهلة لتوفير الوقت: الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ الخاصة بك باستخدام الكواشف من NEB، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة: تُعرف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم المطلوبة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند 65 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 65 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 50%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 50%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، لا حساسية للمثيلة، مثيلة dam: محجوبة بتداخل مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة، النشاط عند درجة حرارة 37 درجة مئوية: 10%، الأسئلة الشائعة : س: لماذا لا يقوم TaqI-v2 بالقطع؟ ج: 1. قد يكون مثبطًا بسبب بعض شوائب التحضير المصغر. يُنصح بالغسل بالدياليز أو الإيثانول. 2. يكون محجوبًا بتداخل مثيلة dam. 3. قد تكون نواتج تفاعل البوليميراز المتسلسل مقاومة للقطع. يُنصح بتنقية الحمض النووي. 4. ينتج عن الحضانة بدون BSA نشاط بنسبة 50%. 5. ينتج عن الحضانة عند 37 درجة مئوية نشاط بنسبة 10%. س: هل يثبط نطاق pH معين نشاط TaqI-v2؟ ج: نعم، ينخفض ​​النشاط إذا لم يكن الرقم الهيدروجيني لمحلول التفاعل بين 7.5 و8.5. س: هل يتعرف TaqI-v2 على مواقع متعددة؟ ج: يستطيع الإنزيم التعرّف على عدم تطابق A/C أو G/T (NAR 14: 459-6590: 1943-1949 (1986) Jiricny, J. Martin, D.). تمثل مواقع النجمة اختلافًا في زوج قاعدي واحد (Gene 65: 149-165, (1988) Barany, F.). س: هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو Dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرّف المحجوبة بمثيلة Dam المتداخلة. للحصول على معلومات حديثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحوّل من BSA إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.