مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0154S، HgaI

تمت إعادة صياغة إنزيم HgaI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10274062. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة، تطبيقات HM، مواصفات هضم إنزيم القطع، تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي ΦX174 في ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r1.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. يحتوي المحلول على: 10 ملي مولار من ثنائي-تريس-بروبان-هيدروكلوريد، 10 ملي مولار من كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف (الأس الهيدروجيني 7 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 25%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : محلول التخزين المخفف A: 10 ملي مولار من تريس-هيدروكلوريد، 50 ملي مولار من كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار من ثنائي ثيوثريتول، 0.1 ملي مولار من حمض الإيثيلين ديامين رباعي الأسيتيك، 50% جلسرين، 200 ميكروغرام/مل من الألبومين المؤتلف، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري. 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محجوبة. الأسئلة الشائعة : س: هل نشاط HgaI حساس لمثيلة dam أو dcm أو CpG في الثدييات؟ ج: نعم. قد لا يقطع HgaI مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تحتوي على مثيلة CpG. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: كم عدد أزواج القواعد التي يجب إضافتها في نهاية بادئ PCR بعد موقع تعرف HgaI لضمان قطع HgaI بشكل صحيح؟ ج: يوصى بإضافة 6 أزواج قواعد في الطرف 5' من موقع التعرف. س: هل يحتوي HgaI على أي نيوشيزومرات؟ ج: لا. للحصول على أحدث المعلومات حول متماثلات/نيوشيزومرات، يرجى الرجوع إلى REBASE. س: هل يُظهر HgaI نشاطًا نجميًا؟ ج: في ظل ظروف تفاعل معينة، مثل انخفاض القوة الأيونية، أو ارتفاع تركيز الإنزيم، أو تركيز الجلسرين الذي يزيد عن 5%، أو درجة حموضة أعلى من 8.0، قد يُظهر إنزيم HgaI نشاطًا غير طبيعي. لا يُنصح بالهضم المفرط باستخدام أكثر من 5 وحدات من HgaI لكل ميكروغرام من الحمض النووي، أو فترات حضانة تزيد عن ساعة واحدة. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري المصل (BSA) إلى الألبومين المؤتلف (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1، وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المؤتلف (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1، وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نشعر أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية هو خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.