مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0158S، HphI

تم إيقاف إنتاج الحجم الكبير من هذا المنتج في 15 ديسمبر 2025. وسيظل الحجم الصغير متوفرًا. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة HM، إنزيمات قطع محددة موفرة للوقت. التطبيقات: الاستنساخ السريع: سرّع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB. مواصفات هضم إنزيم القطع : تعريف الوحدة: تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ في ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer™: NEBuffer™ r1.1: 50%، NEBuffer™ r2.1: 50%، NEBuffer™ r3.1: <10%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، ثم عند 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: محجوبة، مثيلة dcm: محجوبة، مثيلة CpG: غير حساسة. الأسئلة الشائعة : س: هل يوجد تباين في موقع انقسام HphI؟ ج: ثبت أن HphI ينقسم عند N9/N8 اعتمادًا على التسلسل بين موقعي التعرف والانقسام. (Kang, C., Wu, C. (1987) NAR, 15, 2279-2294.; Kang, C., Cho, S. (1990) Mol. Cells 181-186.) س: هل يُظهر HphI نشاطًا نجميًا؟ ج: النشاط النجمي هو تأثير تذبذب يُلاحظ في العديد من إنزيمات النوع IIS، ويُلاحظ بشكل رئيسي على منتجات تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وبعض البلازميدات. ويُلاحظ عند استخدام 12 وحدة لمدة 4 ساعات على حمض نووي phix. يُعزز انخفاض الرقم الهيدروجيني وارتفاع تركيز الجلسرين هذا النشاط. س: ما هو نشاط إنزيم HphI عند درجة حرارة 25 درجة مئوية؟ ج: يكون نشاط إنزيم HphI حوالي 25% عند درجة حرارة 25 درجة مئوية. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يُمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مُصممة ومُؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: اختبرتُ إنزيم التقييد الخاص بكم على الحمض النووي الركيزة الذي أوصت به NEB، ويبدو أنه نشط، ولكنه لا يهضم الحمض النووي الخاص بي. ما السبب المحتمل؟ ج: تُعد جودة ونقاء الحمض النووي من العوامل الرئيسية التي تُؤثر على نشاط الإنزيم. قد تُثبط الأملاح الموجودة في التفاعل إنزيمات التقييد النشطة في محلول rCutSmart®، ولكنها أقل نشاطًا في محلول NEBuffer r2.1 و/أو r3.1 (محاليلنا ذات الملوحة العالية). قد تُنتج إجراءات تنقية الحمض النووي التي تستخدم أعمدة الطرد المركزي محاليل حمض نووي تحتوي على مستويات عالية من الأملاح، والتي قد تنتقل إلى التفاعل وتُثبّط نشاط الإنزيم. ولمنع ذلك، نوصي بألا تتجاوز كمية محلول الحمض النووي المُضاف إلى التفاعل 25% من إجمالي حجم التفاعل. ويمكن تحقيق ذلك بتعديل إجمالي حجم التفاعل وفقًا لذلك. س: هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو DCM أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف المحجوبة بمثيلة Dam أو مثيلة DCM. للحصول على معلومات مُحدّثة حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من BSA إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في NEBuffers؟ يسرّ شركة NEB أن تعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل الألبومين المُعاد تركيبه. ونرى أن التخلي عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونقدم هذا التحسين بنفس السعر.