مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0160S، BclI

تمت إعادة صياغة BclI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10187673. الفئات ذات الصلة : إنزيمات القطع المحددة B، إنزيمات القطع المؤهلة لتوفير الوقت. التطبيقات: هضم إنزيم القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي λ (dam-) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: حضانة محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: 50%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 100%. محلول rCutSmart™: 75%. توافق المخفف : محلول التخزين المخفف A: 10 ملي مولار Tris-HCl، 50 ملي مولار كلوريد البوتاسيوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 200 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تسخين. عدم التثبيط، حساسية المثيلة، مثيلة dam: محجوبة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: غير حساسة، النشاط عند درجة حرارة 50 درجة مئوية: 100% ، الأسئلة الشائعة: س: كيف يمكن تثبيط هذا الإنزيم؟ ج: لتثبيط الإنزيمات التي لا يمكن قتلها بالحرارة، نوصي باستخلاص الفينول متبوعًا بالترسيب بالإيثانول أو عمود طرد مركزي تجاري مصمم لتنقية الحمض النووي. س: هل يجب عليّ إعداد عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ المؤهلة لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون تحلل الحمض النووي. س: هل هذا الإنزيم حساس لمثيلة dam أو dcm أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف المحجوبة بمثيلة dam. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm وCpG Methylation أو REBASE. س: هل يُمكنكم إخباري المزيد عن التحوّل من الألبومين البقري المصلّي (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ شركة NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على الألبومين البقري المصلّي (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه. ونعتقد أن الابتعاد عن المنتجات الحيوانية خطوة في الاتجاه الصحيح، ونُقدّم هذا التحسين بنفس السعر. س: هل تكون بعض إنزيمات التقييد أكثر نشاطًا عند درجات حرارة حضانة أعلى من الموصى بها؟ أ: إنزيمات التقييد من شركة NEB فعّالة بنسبة 100% عند درجة حرارة الحضانة الموصى بها وفي المحلول المنظم الموصى به والمرفق مع كل إنزيم. مع بعض إنزيمات التقييد المعزولة من الكائنات المحبة للحرارة، قد تلاحظ زيادة في النشاط عند درجات حرارة حضانة أعلى. لا ننصح برفع درجة الحرارة، إذ قد تظهر أنشطة نوكلياز إضافية عند درجات حرارة غير موصى بها.