مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0172S، SfaNI

تم إيقاف إنتاج الحجم الكبير من هذا المنتج بتاريخ 31/12/2020. وسيظل الحجم الصغير متوفرًا. الفئات ذات الصلة: إنزيمات القطع المحددة. التطبيقات: هضم إنزيمات القطع. المواصفات: تعريف الوحدة : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من الحمض النووي ΦX174 RF I في ساعة واحدة عند درجة حرارة 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يُحضن عند درجة حرارة 37 درجة مئوية. محلول NEBuffer™ r3.1 بتركيز 1X، يحتوي على: 100 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 50 ملي مولار Tris-HCl، 10 ملي مولار كلوريد المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer : NEBuffer™ r1.1: أقل من 10%، NEBuffer™ r2.1: 75%، NEBuffer™ r3.1: 100%. محلول rCutSmart™: 25%. توافق المخفف: محلول التخزين B: 10 ملي مولار Tris-HCl، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مصل البقر، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. التثبيط الحراري 65 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: تتأثر ببعض تركيبات التداخل. الأسئلة الشائعة: س: هل يُنصح بالهضم المطول باستخدام SfaNI؟ ج: لا، قد يتحلل الحمض النووي. غالبًا ما تُعطي إنزيمات النوع الثاني، مثل SfaNI، نتائج أسوأ إذا أُضيف إنزيم أكثر من اللازم أو إذا استمرت عملية الهضم لأكثر من ساعة. لا يعود هذا التأثير إلى وجود نوكلياز ملوث، بل إلى أنشطة إضافية متأصلة في إنزيم SfaNI. نظرًا لأن هذا الإنزيم يتكون من أجزاء مميزة للتعرف والقطع، فإن التحلل العشوائي للبروتين أثناء الهضم الطويل سيؤدي أحيانًا إلى إطلاق جزء قطع نشط لم يعد مُنظمًا بواسطة جزء التعرف. وبالتالي، سيؤدي الهضم الطويل إلى تكوين نوكلياز. هذه الخاصية تختلف عن نشاط النجمة. س: لماذا تتلطخ الحزم بعد هضم SfaNI عند تشغيل هلام أجاروز عادي؟ أ: يعود ذلك إلى ارتباط الإنزيم بالحمض النووي، مما يُغير معدل الهجرة (أو يُسبب تلطيخًا). يُمكن معالجة ذلك بإضافة مُنظف أيوني (مثل 0.1% SDS) إلى العينة قبل تحميلها على الهلام. بدلاً من ذلك، يُمكن استخلاص العينة بالفينول، أو استخدام عمود تنقية الحمض النووي "سريع الدوران". يرتبط هذا السبب الثاني بميل بعض إنزيمات القطع إلى البقاء مُرتبطة بركائزها بعد القطع. تتميز جميع إنزيمات القطع بألفة ارتباط قوية جدًا بمواقع التعرف الخاصة بها. كما أن لها جميعًا ألفة ثانوية، وأقل نسبيًا، للحمض النووي بشكل عام، وللنصف الناتج عن القطع. تختلف قوة هذه الألفة الثانوية اختلافًا كبيرًا بين إنزيمات القطع. بالنسبة لمعظم إنزيمات القطع، تكون هذه الألفة الثانوية منخفضة بما يكفي لعدم ملاحظتها عند تشغيل نواتج الهضم على الهلام. ولكن، بالنسبة لبعض إنزيمات القطع، يُسبب الارتباط الثانوي تغييرًا في معدل هجرة شظايا الحمض النووي. س: هل يقوم إنزيم SfaNI بقطع الحمض النووي أحادي السلسلة؟ ج: لا. س: ما هي إنزيمات التقييد من شركة NEB التي تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من شركة NEB تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل البنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل صبغ، بنفسجي (6X) س: هل هذا هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو DCM أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تتأثر ببعض تركيبات مثيلة CpG المتداخلة. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نشعر أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية هو خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.