مختبرات نيو إنجلاند البيولوجية، R0176L، DpnI

تمت إعادة صياغة DpnI باستخدام الألبومين المؤتلف (rAlbumin) بدءًا من رقم الدفعة 10196884. الفئات ذات الصلة: إنزيمات التقييد الحساسة للمثيلة والمعتمدة على المثيلة لعلم التخلق، إنزيمات التقييد لتحليل علم التخلق، إنزيمات التقييد الداخلية CG، التطبيقات: الطفرات الموجهة للموقع، الطفرات الموجهة للموقع، الاستنساخ السريع: تسريع عمليات الاستنساخ باستخدام كواشف من NEB، تعريف وحدة المواصفات : تُعرَّف الوحدة الواحدة بأنها كمية الإنزيم اللازمة لهضم 1 ميكروغرام من حمض pBR322 النووي (المُمَثْيَل) في ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية في حجم تفاعل إجمالي قدره 50 ميكرولتر. شروط التفاعل: محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، يُحضن عند 37 درجة مئوية. محلول rCutSmart™ بتركيز 1X، 50 ملي مولار أسيتات البوتاسيوم، 20 ملي مولار أسيتات التريس، 10 ملي مولار أسيتات المغنيسيوم، 100 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب (الأس الهيدروجيني 7.9 عند 25 درجة مئوية). النشاط في محاليل NEBuffer ™: NEBuffer™ r1.1: 100%، NEBuffer™ r2.1: 100%، NEBuffer™ r3.1: 75%، محلول rCutSmart™: 100%. توافق المخفف : المخفف B، محلول التخزين : 10 ملي مولار تريس-هيدروكلوريد، 300 ملي مولار كلوريد الصوديوم، 1 ملي مولار DTT، 0.1 ملي مولار EDTA، 500 ميكروغرام/مل ألبومين مُعاد التركيب، 50% جلسرين، الأس الهيدروجيني 7.4 عند 25 درجة مئوية. تعطيل حراري عند 25 درجة مئوية، ثم عند 80 درجة مئوية لمدة 20 دقيقة. حساسية المثيلة : مثيلة dam: غير حساسة، مثيلة dcm: غير حساسة، مثيلة CpG: محجوبة بالتداخل. الأسئلة الشائعة : س: هل يقوم إنزيم DpnI بقطع الحمض النووي نصف المثيل؟ ج: يقوم إنزيم DpnI بقطع مواقع dam نصف المثيلة ببطء 60 مرة أبطأ من المواقع المثيلة بالكامل. س: ما الفرق بين DpnI وDpnII وMboI وSau3AI؟ ج: جميعها تتعرف على نفس التسلسل ولكن لها حساسية مختلفة للمثيلة. يقوم إنزيم DpnI بقطع مواقع dam المثيلة بالكامل ومواقع dam نصف المثيلة ببطء 60 مرة أبطأ. يشترك إنزيما DpnII وMboI في حساسية المثيلة ويقومان بقطع مواقع dam التي تفتقر إلى المثيلة؛ ويتم حجب كل منهما بواسطة مثيلة dam الكاملة، وربما بواسطة المثيلة النصفية أيضًا. يقوم إنزيم Sau3AI بقطع جميع مواقع dam بغض النظر عن وجود الأدينوميثيل، ولكنه يُحجب تمامًا بواسطة السيتوزينات الميثيلية ضمن تسلسل dam. س: هل يجب عليّ تحضير عمليات الهضم باستخدام إنزيمات Time-Saver™ لمدة 5-15 دقيقة؟ هل يمكنني الهضم لفترة أطول؟ ج: تتميز إنزيمات Time-Saver™ من NEB بسرعة عملها (5-15 دقيقة)، كما أنها مصممة ومؤهلة لتحمل عمليات الهضم طوال الليل دون إتلاف الحمض النووي. س: ما هي إنزيمات التقييد من NEB التي تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X)؟ ج: جميع إنزيمات التقييد HF ومعظم إنزيمات التقييد غير HF من NEB تأتي مزودة بصبغة تحميل الجل، بنفسجية (6X). الإنزيمات المقيدة غير HF التي تأتي مع الصبغة الأرجوانية هي: AatII AsiSI BsmBI-v2 EagI MboI NlaIII PvuI SmaI Acil AvrII BspHI EcoRI MboII NotI RsaI SpeI AfeI BamHI BsrGI EcoRV MluI NspI SacI StuI AflII BbsI ClaI Esp3I FseI MseI PacI SacII AgeI BglII DdeI HaeIII MspI PciI Sali XbaI AluI BsaI DpnI HindIII NcoI PmeI SapI XhoI ApaI BseYI DpnII HpaI NdeI PsiI-v2 SfaNI XmaI ApeKI BsiWI DraI KpnI NheI PstI SfiI XmnI AscI * يتم أيضًا توفير جميع إنزيمات تقييد HF مع تحميل الجل صبغ، بنفسجي (6X) س: هل هذا هل هذا الإنزيم حساس لـ Dam أو DCM أو مثيلة CpG في الثدييات؟ ج: نعم. لا يستطيع هذا الإنزيم قطع مواقع التعرف في الحمض النووي الجينومي للثدييات التي تُحجب بمثيلة CpG المتداخلة. للحصول على أحدث المعلومات حول حساسية المثيلة، يُرجى زيارة Dam-Dcm ومثيلة CpG أو REBASE. س: هل يمكنك إخباري المزيد عن التحول من الألبومين البقري (BSA) إلى الألبومين المُعاد تركيبه (rAlbumin) في محاليل NEBuffers؟ ج: يسرّ NEB أن تُعلن عن استبدال محاليل التفاعل المحتوية على BSA (NEBuffer 1.1، 2.1، 3.1 وCutSmart® Buffer) بمحاليل تحتوي على الألبومين المُعاد تركيبه (NEBuffer r1.1، r2.1، r3.1 وrCutSmart™ Buffer). كما أننا بصدد تحويل جميع تركيبات إنزيمات التقييد لتشمل rAlbumin. نشعر أن الابتعاد عن المنتجات التي تحتوي على مكونات حيوانية هو خطوة في الاتجاه الصحيح، ونحن قادرون على تقديم هذا التحسين بنفس السعر.